一种鲫鱼中残留结晶紫的测定方法

摘要

本发明公开了一种鲫鱼中残留结晶紫的测定方法，即采用毛细管电泳-紫外可见检测法测定，其流动相为pH4.0、浓度为100mmol/L磷酸-磷酸二氢钠缓冲溶液，使用前经0.22um微滤膜过滤；检测过程控制紫外检测波长267nm，分离电压为12kV。采用的流动相无毒，溶剂甲醇低毒，对环境友好，成本低廉，操作简单，灵敏度和检测限均能达到所需要求。本发明的检测方法，测定成本低廉，操作简单，标准溶液最低检限为1μg/kg，检测精度指标为RSD<6%，基本能达到国家规定的水产品中结晶紫残留不高于2μg/kg的指标要求。

主权项

一种鲫鱼中残留结晶紫的测定的方法，其特征在于利用毛细管电泳‑紫外可见检测法进行测定，毛细管电泳的流动相为pH4.0、浓度为100mmol/L磷酸‑磷酸二氢钠缓冲溶液，其具体包括下列步骤：（1）、试剂的配制0.03mol/L硼氢化钾溶液，现配现用，用水溶解0.405g硼氢化钾并定溶至250ml；0.2mol/L硼氢化钾溶液，现配现用：用水溶解1.08g硼氢化钾并定溶至100ml；20%盐酸羟胺溶液：用水溶解25g盐酸羟胺并定溶至100ml；0.05 mol/L对甲苯磺酸溶液：0.95g对甲苯磺酸用水溶解并稀释至100ml.（2）、标准曲线的绘制将结晶紫溶于甲醇，配制成100μg/ml的结晶紫标准甲醇溶液；再上述制备好的浓度为100μg/ml的结晶紫标准甲醇溶液，逐滴加入步骤（1）配制的0.03mol/L硼氢化钾溶液直到溶液变为无色，然后用甲醇稀释成浓度为1μg/ml的隐色结晶紫标准工作液；按上述方法再准确配制浓度分别为2、4、8、16、32μg/ml的隐色结晶紫标准工作液；进TriSepTM‑2100加压毛细管电色谱仪用CE模式测定，以结晶紫标准工作液的浓度对峰面积作标准曲线；（3）、待测鲫鱼样品的预处理称取5.00 g待测鲫鱼背脊肉组织于50ml离心管内，加入10ml乙腈，10000r/min匀浆提取30s，加入5g酸性氧化铝，震荡2min，4000r/min离心10min，上清液A转移至125ml分液漏斗中，在分液漏斗中加入2ml二甘醇，3 mL0.2 mol/L硼氢化钾溶液，振摇2min；取10ml乙腈，移入离心管的沉淀E中，再加入3ml 0.2mol/L硼氢化钾溶液，用玻璃棒捣散离心管中的沉淀E并搅匀，旋涡混匀器上振荡1 min，静置20min，4000r/min离心10min，得沉淀F，上清液B并入上述的含有上清液A的125ml分液漏斗中；在50ml离心管的沉淀F中继续加入1.5ml盐酸羟胺溶液、2.5ml对甲苯磺酸溶液，震荡2min，再加入10ml乙腈，继续震荡2 min，4000r/min离心10min，得沉淀G，上清液C并入上述的含有上清液A和B的125ml分液漏斗中；再次在50ml离心管的沉淀G中继续加入1.5ml盐酸羟胺溶液、2.5ml对甲苯磺酸溶液，震荡2min，再加入10ml乙腈，继续震荡2 min，4000r/min离心10min，上清液D并入上述的含有上清液A、B及C的125ml分液漏斗中；在上述的含有上清液A、B、 C及D的125ml分液漏斗中加入20ml二氯甲烷，剧烈振摇2min，静置分层，将下层溶液转移至100ml茄形瓶，45℃旋转蒸发至近干得残渣H，用甲醇溶解残渣H，过0.22um微滤膜，甲醇定容至5ml，得待测样液；（4）、待测样品的分析将步骤（3）所得的样液在流动相为pH4.0浓度为100mmol/L的磷酸‑磷酸二氢钠缓冲溶液紫外检测波长267nm和分离电压为10~14kV的实验条件下，进行毛细管电泳检测分析，测得峰面积，然后通过步骤（2）所得的标准曲线求得待测鲫鱼样品中的残留结晶紫浓度。