用磁性纳米粒子固定葡萄糖氧化酶测定痕量葡萄糖的方法

摘要

本发明公开了一种用磁性纳米粒子固定葡萄糖氧化酶测定痕量葡萄糖的方法。在碳糊电极表面，通过磁性纳米粒子而修饰固定在电极表面的葡萄糖氧化酶氧化溶液中的葡萄糖生成双氧水，双氧水与鲁米诺溶液形成电致化学发光体系。该体系在电极电压的作用下产生非常强的电致化学发光信号和电化学信号。光信号强度在一定范围内与溶液中的葡萄糖浓度成正比。据此建立了一种测定葡萄糖的电致化学发光分析方法。在+0.2～+1.4V(vs.SCE)电位范围内进行循环伏安扫描，葡萄糖在1×10-5～1.0×10-2mol/L浓度范围内与电致化学发光峰强度ip呈良好的线性关系。本发明克服了现有技术存在过于复杂等诸多缺点，灵敏度高，对于葡萄糖的检测易于自动化。

主权项

一种测定痕量葡萄糖的方法，其特征在于具体步骤为：(1)分别截取铁棒和玻璃管，并把铁棒和玻璃管的两端磨平、洗净；将固体石蜡和碳粉按质量比为2～4∶1比例混合，稍加热至石蜡熔化，搅拌均匀，填入玻璃管中；将铁棒插入玻璃管的一端中，用石蜡固定住，冷却后，除去管外多余杂物，并在光滑纸上抛光表面，为保证足够大的磁力；玻璃管的另一端电极端为石蜡碳糊薄层，制得固体石蜡碳糊电极；最后玻璃管石蜡碳糊的薄层的一端碳糊电极在使用前分别用体积比为1∶1的硝酸和无水乙醇清洗，然后用二次蒸馏水冲洗干净；(2)称取FeCl3·6H2O和FeSO4·7H2O，以Fe2+/Fe3+＝1∶2的摩尔比溶解在二次蒸馏水中得混合溶液，滴加体积百分比为25％的氨水使混合溶液pH＝9～12，室温下搅拌20～40分钟，然后升温到80℃并保持溶液pH＝9～12不变，加热熟化20～40分钟；制备的黑色悬浮液超声10～30分钟，在磁铁分离下，用热水洗涤到中性得磁性纳米Fe3O4粒子；(3)称取45～55mg步骤(2)所得的磁性纳米Fe3O4粒子超声分散在15‑25mL无水乙醇中，搅拌下加入0.1～0.3mL体积百分浓度为98％γ‑氨丙基三乙氧基硅烷，室温下搅拌反应9～20小时，收集的磁性粒子分别用无水乙醇和二次蒸馏水超声清洗后定容得氨基化后的磁性纳米Fe3O4粒子；(4)用磁铁吸住步骤(1)制得的固体石蜡碳糊电极的铁棒端，取步骤(3)制得的氨基化后的磁性纳米Fe3O4粒子滴加在步骤(1)制得的电极表面，晾干后，滴加体积百分浓度为0.25％的戊二醛在修饰电极表面，放入4℃冰箱1小时后，用水淋洗并吹干，然后滴加葡萄糖氧化酶溶液，放入4℃冰箱中过夜；使用前，把电极置于搅动的蒸馏水中清洗5～10分钟；每次使用后，移去磁铁，用蒸馏水冲洗，洗去磁性纳米复合葡萄糖氧化酶粒子以便更新电极；电极不用时放入4℃冰箱中保存；(4)检测方法：室温下，选取扫描速率为50mV/s，扫描范围为+0.2～+1.4V(vs.SCE)，光电倍增管高压600v，采样速率10T/S，放大级数3，测量时间60s进行循环伏安法试验，测量不同浓度葡萄糖在含0.5mmol/L鲁米诺的pH为8.00.的1mol/L硼酸钠缓冲溶液的电致化学发光的强度，绘制工作曲线；葡萄糖在1.0×10‑5～1.0×10‑2mol/L浓度范围内与电致化学发光峰强度呈良好的线性关系：ip＝65.4C+23.9，相关系数R＝0.9987，检测限为1μmol/L。