Procedimientos para generar genotecas muy diversas

摘要

Un procedimiento para generar una genoteca de ácidos nucleicos, comprendiendo dicho procedimiento: (a) proporcionar una población de moldes de ácidos nucleicos monocatenarios, comprendiendo cada uno de dichos moldes una secuencia codificante y una secuencia promotora unida operativamente; (b) hibridar con dicha población de moldes de ácidos nucleicos monocatenarios una mezcla de fragmentos de ácidos nucleicos monocatenarios sustancialmente complementarios, siendo dichos fragmentos de una longitud más corta que dichos moldes de ácidos nucleicos; (c) poner en contacto cada uno de los productos de hibridación de la etapa (b) tanto con una polimerasa de ADN que carece de actividad de desplazamiento de hebra como con una ligasa de ADN en unas condiciones en las que dichos fragmentos hibridados aleatoriamente actúen como cebadores para completar unas segundas hebras de ácidos nucleicos que son sustancialmente complementarias a dichos moldes de ácidos nucleicos, produciendo así una población de hebras codificantes con mutaciones que codifican para hebras que difieren entre sí en número, posición e identidad de dichas mutaciones; y (d) poner en contacto los productos de la etapa (c) con una polimerasa de ARN para generar una genoteca de ARN, siendo transcrita dicha genoteca a partir de dichas segundas hebras de ácidos nucleicos.