DON毒素的制备纯化方法

摘要

本发明涉及一种DON毒素的制备纯化方法，是利用禾谷镰刀菌生产DON毒素，生产中使用的种子培养基和发酵培养基均为液体培养基，其中，种子培养基由下列组分按照体积百分比混合：蔗糖1％，硝酸铵0.2％，硫酸镁0.05％，硫酸铁0.02％，磷酸二氢钾0.2％，蛋白胨0.4％，酵母浸膏0.2％，余量为水；所述的发酵培养基是由下列组分按照体积百分比混合：硝酸铵0.1％，磷酸二氢钾0.3％，硫酸镁0.05％，氯化钠0.4％，蔗糖2％，甘油1％，硫酸锌0.002％，余量为水；具体制备纯化方法是通过活化、培养、发酵、纯化等步骤获得纯化的DON毒素。

主权项

一种DON毒素的制备纯化方法，是利用禾谷镰刀菌生产DON毒素，其特征在于：生产中使用的种子培养基和发酵培养基均为液体培养基，其中，种子培养基由下列组分按照体积百分比混合：蔗糖1％，硝酸铵0.2％，硫酸镁0.05％，硫酸铁0.02％，磷酸二氢钾0.2％，蛋白胨0.4％，酵母浸膏0.2％，余量为水；所述的发酵培养基是由下列组分按照体积百分比混合：硝酸铵0.1％，磷酸二氢钾0.3％，硫酸镁0.05％，氯化钠0.4％，蔗糖2％，甘油1％，硫酸锌0.002％，余量为水；具体制备纯化方法是：a)将谷镰刀菌经活化，接种于种子培养基中，25～28℃，摇床黑暗培养3天，获得种子液；b)将种子液按5％的接种量接种于发酵培养基中，25～28℃，摇瓶或发酵罐黑暗培养15～20天，获得发酵培养液；c)将发酵培养液离心后取上清，用乙酸乙酯萃取，将萃取所得的乙酸乙酯浓缩，得DON毒素的粗提取液；d)将DON毒素粗提取液旋转蒸干后，用环己烷与乙酸乙酯混合溶液溶解，过60‑100目的柱层析硅胶柱，依次分别用不同配比的环己烷与乙酸乙酯混合洗脱液洗脱，用TLC方法检测每管洗脱液中含有DON毒素的情况；e)选择含有DON毒素的几管洗脱液旋转浓缩后，再过60‑100目的柱层析硅胶柱，依次分别用不同配比的环己烷与乙酸乙酯混合洗脱液洗脱，用TLC方法检测每管洗脱液中含有DON毒素的情况；f)选择只含有DON毒素的几管进行合并后旋转蒸干，溶于少量的甲醇中，4℃条件下形成第一次结晶；g)把第一次结晶重新溶解于甲醇中，4℃条件下进行二次结晶，获得纯化的DON毒素；在d步骤中，所述的环己烷与乙酸乙酯混合溶液中，环己烷与乙酸乙酯的体积比为5∶1，所述的不同配比的环己烷与乙酸乙酯混合洗脱液是指：环己烷与乙酸乙酯的体积比分别为5∶1、8∶3、5∶3、1∶1、3∶5和1∶5；在e步骤中，所述的不同配比的环己烷与乙酸乙酯混合洗脱液是指：环己烷与乙酸乙酯的体积比分别为8∶3、5∶3、1∶1、3∶5和1∶5；在d步骤和e步骤中，环己烷与乙酸乙酯混合洗脱液的使用顺序均为：环己烷的 比例由大到小逐级递减。