抗菌肽buforinⅡ和猪INF-α融合表达毕赤酵母菌及其应用

摘要

本发明公开了一种抗菌肽buforin II和猪INF-α融合表达毕赤酵母菌及制备方法和应用，毕赤酵母菌(Pichia pastoris FZM2009，CCTCC NO：M209259)。其步骤是：A、表达盒PAOX1-αFactor-IFNα-6×His-bufforin II-Zeocinr的构建；B、表达工程菌Pichia pastoris FZM2009的构建，经抗生素Zeocin筛选和PCR鉴定得到工程菌。C、融合蛋白的制备步骤是：1)在含有100μg/ml Zeocin的YPD平板上复苏；2)挑单克隆接种于含有YPD培养基中，振摇培养；3)将一体积培养物接种于十体积发酵培养基培养；4)离心，获取上清；5)加一倍体积上样缓冲液上清中，电泳检测；6)上清液过分子筛凝胶柱，收集组分；7)冷冻干燥收集的组分，得到融合蛋白；8)用肠激酶酶切融合蛋白获得buforin II和IFNα。融合表达融合蛋白buforin II和INF-α应用猪饲料。方法易行、操作简便、表达量高、成本低廉、生物学活性强。

主权项

一种抗菌肽buforin II和猪INF‑α融合表达毕赤酵母菌，其特征在于：所述的毕赤酵母菌(Pichia pastoris)FZM2009的保藏编号为CCTCC NO：M 209259。