一种基于组织芯片的肿瘤特异性靶点及靶向配体筛选方法

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种基于组织芯片的肿瘤特异性靶点及靶向配体筛选方法。本发明的目的在于克服现有技术中药物或靶向治疗通用性不高、筛选系统与肿瘤在体生存环境差距大、筛选通量小、费时费力的缺点，提供一种利用组织芯片筛选肿瘤特异性靶点及靶向配体的方法。利用本发明筛选到的靶向配体有较高的特异性，可穿越肿瘤细胞，不会引起免疫反应，通用性高。本筛选方法保持了肿瘤在体生长时原始状态，与荷瘤小鼠筛选系统相比，省去了动物饲养步骤，省时、省力、节约成本，且实验结果可比性强。与传统筛选系统相比，本发明可同时进行肿瘤特异性靶点分析和靶向配体的研究，且验证方法简单。

主权项

一种基于组织芯片筛选肿瘤特异性靶点和靶向配体的方法，包括组织芯片预处理、噬菌体扩增与纯化、噬菌体序列分析、抗原鉴定，其特征在于：(a).将正常组织芯片进行抗原修复的预处理后，进行内源性酶封闭处理，然后加入配体库，使配体与正常组织上表达的抗原结合；(b).洗涤正常组织芯片，从而得到大量未与正常组织结合的配体混合物；(c).将步骤(b)中得到的配体混合物加入到经过抗原修复且封闭了内源性酶的肿瘤组织芯片上，使配体与肿瘤组织上表达的特异性抗原结合；(d).除去步骤(c)中未与肿瘤组织芯片结合的配体后，用洗脱液洗涤肿瘤组织芯片从而得到大量与肿瘤组织结合的噬菌体混合物；(e).将步骤(d)中得到的噬菌体混合物进行扩增，然后纯化，再重复步骤(a)‑(d)3次以上，且逐轮提高洗脱强度，得到不与正常组织结合，但特异性结合肿瘤组织的配体混合物；(f).将步骤(e)中得到的特异性结合肿瘤组织的配体混合物进行序列分析，选出共有序列高的特异性配体；(g).将步骤(f)中筛选到的共有序列高的特异性配体返回到淘选时所用的肿瘤组织芯片上进行验证，然后对所得到的配体进行特异性和通量分析；(h).利用特异性配体来鉴定其所结合的抗原。