一种提高抗真菌蛋白质抗菌活性的方法

摘要

本发明属于基因工程技术领域，具体为一种用于改造抗真菌蛋白质的方法。本发明包括将编码几丁质结合域的DNA序列与编码抗真菌蛋白质的cDNA序列以正确读码框连接，然后克隆到蛋白质表达载体中，使用工程菌对融合蛋白质进行表达，进一步利用商业化介质进行蛋白质纯化。还包括纯化后的蛋白质的几丁质结合能力的检测以及抗真菌活性分析。本发明可提高抗真菌蛋白质的抗菌效率。应用本发明可以改造现有抗真菌蛋白质的活性，提高它们对真菌细胞壁的靶向结合能力。

主权项

一种用于改造抗真菌蛋白质的方法，其特征在于将具有真菌结合能力的几丁质结合域与抗真菌蛋白质相连，使原抗真菌蛋白质带有几丁质结合域；具体步骤如下：(1)通过PCR手段，得到抗真菌蛋白质的开放阅读框序列，克隆到适当的表达载体中，然后将几丁质结合域的编码序列再次插入到该载体中，与抗真菌蛋白质的读码框相融合，间隔适当核苷酸以保证酶切位点及阅读框的正确；(2)将步骤(1)中的表达载体转入大肠杆菌，得到的基因工程菌接种于LB液体培养基中，培养到对数生长期后以IPTG诱导蛋白质的表达，然后超声破菌，获得总的菌体蛋白质；(3)利用载体所带的蛋白质表达标签的亲和介质纯化步骤(2)所得蛋白质，透析，获得纯化的带有几丁质结合域的抗真菌蛋白质；其中，所述抗真菌蛋白质为Ace‑AMP1。