一种大肠菌群的快速检测方法

摘要

本发明涉及一种大肠菌群的快速检测方法。利用大肠菌群细胞在短时间培养过程中会产气，可以发酵乳糖产酸，使大肠菌群细胞与伊红美兰结合，而使伊红美兰混合培养溶液生成的紫黑色或紫红色沉淀，通过生物显微镜镜检计数，将紫黑色或紫红色沉淀细菌经过革兰氏染色呈现阴性的细菌的图像个数，来计数大肠菌群数量的大肠菌群快速检测方法；或者由于伊红美兰混合培养溶液生成的紫黑色或紫红色的沉淀，而使伊红美兰混合培养溶液颜色变化，利用伊红美兰混合培养溶液颜色变化的程度与大肠菌群细胞数量相关的特性，识别大肠菌群细胞数的大肠菌群快速检测方法，本发明方法适合生物学界、医药界、食品界以及各种物品中大肠菌群的快速检测。

主权项

一种非诊断目的的大肠菌群的快速检测方法，其特征在于，将检测样品经过处理，利用大肠菌群细胞在伊红美兰混合培养溶液中短时间培养过程中会产气，发酵乳糖产酸，使伊红美兰混合培养溶液生成紫黑色或紫红色的细菌沉淀，从而使伊红美兰混合培养溶液颜色变化，通过生物显微镜镜检计数，用紫黑色或紫红色沉淀细菌经过革兰氏染色呈现阴性的细菌的图像个数来计数大肠菌群数量；利用伊红美兰混合培养溶液颜色变化的程度与大肠菌群细胞数量相关的特性，通过伊红美兰混合培养溶液的颜色来识别大肠菌群细胞数，具体计数法分别为：比色法或分光光度法；所述的伊红美兰混合培养溶液的制取包括以下步骤：按照22.5g乳糖胆盐发酵培养基粉末∶0.409g～0.727g伊红∶0.066g～0.182g美兰∶500mL蒸馏水的比例，溶于蒸馏水中，然后，按照溶液1mL∶30μL1％乳酸溶液的比例加入乳酸，配制成伊红美兰混合培养溶液，伊红美兰混合培养溶液为中性，pH为6.95～7.07，放在电炉上煮沸，用锡纸封口，灭菌后待用；所述的检测样品经过处理包括以下步骤：1)以无菌操作取样品25g或25mL，粉碎后放入装有175mL无菌生理盐水的灭菌玻璃瓶中，瓶内预置适当数量的玻璃珠，混合均匀；2)采用中速定量滤纸过滤样品匀液，用50mL无菌生理盐水均匀冲洗残留在滤纸上的物质，继续收集滤液，制成1∶10的样品匀液；3)采用膜过滤器浓缩1mL待检测样品浓缩出少量菌液，取膜过滤器上部浓缩的菌液加入无菌离心管中；4)用移液管移取0.3mL～1mL伊红美兰混合培养溶液，加入到盛有样品浓缩菌液的离心管中，盖上离心管的盖子，放入36℃±1℃恒温箱中短时间培养；所说的短时间培养为5min～150min。