| 摘要 |
En la presente se describen métodos para la produccion eficiente de anticuerpos y otros complejos de proteínas multiméricas (a los que se hace referencia en conjunto en la presente como proteínas heteromultiméricas) capaces de unirse específicamente a más de un blanco. Los blancos pueden ser, por ejemplo, diferentes epítopos en una sola molécula o ubicados en diferentes moléculas. Los métodos combinan nivel de expresion génica alto eficiente, ensamblaje adecuado, y facilidad de purificacion para las proteínas heteromultiméricas, además se proporciona método de uso de estas proteínas heteromultiméricas, y composiciones, kits y artículos de produccion que comprenden estos anticuerpos. Reivindicacion 1: Un método de preparacion de una proteína heteromultimérica que comprende un primer polipéptido que contiene bisagra que tiene un primer dominio de heterodimerizacion y un segundo polipéptido que contienen bisagra que tiene un segundo dominio de heterodimerizacion, en donde el segundo dominio de heterodimerizacion interactua con el primer dominio de heterodimerizacion, y en donde el primer y segundo polipéptido que contienen bisagra están unidos por al menos un enlace disulfuro intracatenario, el método que comprende las etapas de: (a) cultivar una primera célula huésped que comprende un primer ácido nucleico que codifica el primer polipéptido que contiene bisagra en condiciones donde se expresa el polipéptido que contiene bisagra; (b) cultivar una segunda célula huésped que comprende un ácido nucleico que codifica el segundo polipéptido que contiene bisagra en condiciones donde se expresa el polipéptido que contiene bisagra; (c) alterar las membranas celulares de la primera y la segunda células huésped, en donde la primera y la segunda células huésped se han combinado juntas en una sola suspension; y (d) recuperar la proteína heteromultimérica, en donde dicho método no requiere el agregado de un reductor. |
