一种快速检测细胞内火鸡疱疹病毒的方法

摘要

本发明提供一种快速检测细胞内火鸡疱疹病毒的方法，涉及病毒检测领域。该检测方法包括如下步骤：样品处理；PCR扩增反应：以样品DNA作为模板，以HVT_F、HVT_R为引物，进行PCR扩增反应，获得PCR扩增产物；电泳检测及结果分析：取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，若PCR电泳图谱中，对应于样品DNA的泳道在666bp处有特异性扩增条带，则该样品感染了火鸡疱疹病毒。本发明根据HVT核苷酸序列设计引物HVT_F和HVT_R，实现了HVT的快速检测，无需提取DNA，操作简单，检测方便。

主权项

一种快速检测细胞内火鸡疱疹病毒的方法，包括如下步骤：(1)样品处理：用胰酶消化待检测的感染HVT‑FCl26的鸡胚成纤维细胞，离心后取沉淀，用缓冲液悬浮该沉淀，即得到样品DNA；(2)PCR扩增反应：以样品DNA作为模板，以HVT_F、HVT_R为引物，进行PCR扩增反应，获得PCR扩增产物；所述HVT_F的序列为5′‑TTCGACATTCATGATGTTCTGGTG‑3′，所述HVT_R的序列为5′‑TGCGCTCGAAGAGTTACCGATC‑3′；所述PCR扩增反应体系为：样品DNA、2.5μL的10×PCR缓冲液、2μL浓度为25mM的MgCl2、0.5μL浓度为10mM的dNTPs、1.5μL浓度为10μmol/L的HVT_F、1.5μL浓度为10μmol/L的HVT_R、0.5μL浓度为5U/μL的TaqDNA聚合酶、14.5μL的ddH2O；所述PCR扩增反应程序为94℃预变性10min；94℃变性45sec、54‑57℃退火45sec、72℃延伸1min，35次循环；最后72℃延伸10min，获得PCR扩增产物；(3)电泳检测及结果分析：取PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，若PCR电泳图谱中，对应于样品DNA的泳道在666bp处有特异性扩增条带，则该样品感染了火鸡疱疹病毒。