固公果根提取物的鉴别方法

摘要

本发明公开了一种固公果根提取物的鉴别方法，包括如下步骤：第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱：供试品溶液的制备；参照物溶液的制备；采用十八烷基硅氧键合硅胶为固定相；以乙腈和冰醋酸的水溶液进行梯度洗脱；以儿茶素计算，理论塔板数为5000-20000；分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，用液相色谱法测定，制定固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱；第二步，用与第一步相同的方法测定待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱；第三步，将待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱与固公果根提取物酚酸酸类成分标准指纹图谱对比，鉴别固公果根提取物的质量。本发明为完整、准确评价固公果根提取物的质量提供了新的方法和手段。

主权项

一种固公果根提取物的检测方法，包括如下步骤：第一步，先建立酚酸类成分标准指纹图谱，方法如下：(a)供试品溶液的制备：精密称取固公果根药材适量，加入含有盐酸的体积分数为0％‑100％的甲醇水溶液、含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液、体积分数为0％～2％的盐酸水溶液、体积分数为1％～100％甲醇水溶液或体积分数为1％～95％的乙醇水溶液为提取溶剂，所述提取溶剂的加入质量为药材质量的4～12倍，振摇后浸泡提取2～12h，提取1‑3次，过滤，合并提取液，在25～60℃加热减压干燥至干，得到固公果根提取物；用体积分数为0％～100％的甲醇水溶液或体积分数为0％～100％的乙醇水溶液溶解稀释固公果根提取物，配置成5mg～20mg/mL的供试品溶液；所述含有盐酸的体积分数为0％‑100％的甲醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～2％；所述含有盐酸的体积分数为1％～95％的乙醇水溶液中盐酸的体积分数为0.1％～2％；(b)参照物溶液的制备：精密称取对照品儿茶素，用体积分数为0％～100％甲醇水溶液或体积分数为0％～100％乙醇水溶液溶解稀释，配置成0.01mg～5mg/mL的供试品溶液为参照物溶液；(c)色谱条件：采用十八烷基硅氧键合硅胶为固定相；以乙腈和冰醋酸的水溶液进行梯度洗脱；流速0.7mL/min；检测波长为260‑320nm；色谱柱温度为25‑35℃；以儿茶素计算，理论塔板数为5000‑20000；所述乙腈和冰醋酸的水溶液由A相和B相组成，按质量比A相组成为：冰醋酸∶水＝2∶98，按质量比B相组成为：乙腈∶水∶冰醋酸＝80∶19.6∶0.4，所述梯度洗脱程序如下：0分钟到3分钟，B相流动相所占体积百分比为0；3到6分钟，B相流动相所占体积百分比从0递增到4％；6分钟到15分钟，B相流动相所占体积百分比从4％递增到10％；15分钟到30分钟，B相流动相所占体积百分比从10％递增到15％；30分钟到50分钟，B相流动相所占体积百分比从15％递增到23％；50分钟到60分钟，B相流动相所占体积百分比从23％递增到25％；60分钟到70分钟，B相流动相所占体积百分比从25％递增到80％；70分钟到73分钟，B相流动相所占体积百分比降至0；73分钟到80分钟，B相流动相所占体积百分比维持在0。(d)测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，用液相色谱法测定，紫外检测器或者二极管阵列检测器进行检测，制定固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱；所述固公果根提取物酚酸类成分指纹图谱中，有二十个共有色谱峰，以参照物儿茶素的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述二十个共有色谱峰分别是1号峰：平均相对保留时间RRT为0.43±0.01，相对峰面积为13％，2号峰平均相对保留时间RRT为0.88±0.01，相对峰面积为63％，3号峰平均相对保留时间RRT为0.93±0.01，相对峰面积为61％，4号峰平均相对保留时间RRT为0.97±0.01，相对峰面积为75％，5号峰平均相对保留时间RRT为1.00，相对峰面积为100％，6号峰平均相对保留时间RRT为1.04±0.01，相对峰面积为118％，7号峰平均相对保留时间RRT为1.22±0.01，相对峰面积为21％，8号峰平均相对保留时间RRT为1.26±0.01，相对峰面积为48％，9号峰平均相对保留时间RRT为1.28±0.01，相对峰面积为25％，10号峰平均相对保留时间RRT为1.29±0.01，相对峰面积为66％，11号峰平均相对保留时间RRT为1.30±0.01，相对峰面积为16％，12号峰平均相对保留时间RRT为1.39±0.01，相对峰面积为40％，13号峰平均相对保留时间RRT为1.41±0.01，相对峰面积为50％，14号峰平均相对保留时间RRT为1.52±0.01，相对峰面积为32％，15号峰平均相对保留时间RRT为1.53±0.01，相对峰面积为50％，16号峰平均相对保留时间RRT为1.55±0.01，相对峰面积为66％，17号峰平均相对保留时间RRT为1.62±0.01，相对峰面积为98％，18号峰平均相对保留时间RRT为1.75±0.01，相对峰面积为135％，19号峰平均相对保留时间RRT为1.78±0.01，相对峰面积为73％，20号峰平均相对保留时间RRT为1.80±0.01，相对峰面积为98％，所述二十个色谱峰峰面积的相似度不小于0.65；第二步，用与第一步相同的方法测定待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱；第三步，将待测固公果根提取物酚酸类成分样品指纹图谱与固公果根提取物酚酸酸类成分标准指纹图谱对比，鉴别固公果根提取物的质量。