利用核酸外切酶的3’-5’外切酶活性克隆目的DNA的方法

摘要

本发明提供了一种利用核酸外切酶的3’-5’外切酶活性克隆目的DNA的方法，其是向含有线性载体和目的DNA片段的体系中加入具有3’-5’外切酶活性的核酸外切酶，在冰上消化30sec～3min，使两者产生具有同源序列的5’末端，然后在70～75℃下使酶失活，最后退火使线性载体和目的DNA片段重组形成带有缺刻的环形质粒，并转化到大肠杆菌中修复缺刻并随宿主基因组进行复制。本发明通过使酶热失活而终止消化反应，操作简单易行，同时也继承了其它LIC系统阳性率高的优势，因此适用于大规模的基因克隆及载体构建。

主权项

一种利用核酸外切酶的3’‑5’外切酶活性克隆目的DNA的方法，其特征在于，向含有线性载体和目的DNA片段的体系中加入具有3’‑5’外切酶活性的核酸外切酶，在冰上消化30sec～3min，使两者产生具有同源序列的5’末端，然后在70～75℃下使酶失活，最后退火使线性载体和目的DNA片段重组形成带有缺刻的环形质粒，并转化到大肠杆菌中修复缺刻并随宿主基因组进行复制。