| 主权项 |
1.一种液相色谱和电喷雾串联质谱联用在烟草生产中的应用，其特征在于应用于测试多种或批量烟草样品中的20种氨基酸含量；所述应用采用以下仪器、材料与试剂：美国热电公司LC-MS LTQ液相色谱-离子阱质谱仪，配备自动进样器、四元梯度质谱泵，LTQ离子阱质谱带电喷雾电离源，Xcalibur1.4SR1系统控制软件；意大利Claind N2LCMS氮气发生器；法国Millipore Element A10纯水机；美国Cole-Parmer 8892超声清洗器；Sartorious CP225D电子天平；Whatman 0.2μm尼龙针式滤头；磨样机磨出的烟草粉末；Fluka公司的混合氨基酸标准溶液，含17种氨基酸，浓度各为1mM；上海丽珠东风生物技术有限公司的内标物L-正缬氨酸；上海伯奥生物科技有限公司的天冬酰胺·水；国药集团化学试剂有限公司的色氨酸、脯氨酸和谷氨酰胺；Sigma公司的γ-氨基丁酸；Aldrich公司的L-哌啶-2-羧酸、九氟戊酸；MERCK公司的甲醇和乙腈；优级纯浓盐酸；Milli-Q级水，由Milliore Element A10制备，若不经特别说明，实验中用水均为Milli-Q级水；所述应用的液相色谱条件为：热电HyPURITY C<sub>18</sub>色谱柱，200mm×2.1mm，5μm；安捷伦Reliance保护柱套和Eclipse XDB-C8保护柱，12.5mm×2.1mm，5μm；进样方式：全环，5μL；流速：200μL/min；柱温箱：25℃；样品盘温度：15℃；注射器冲洗体积：1000μL；洗针体积：800μL；流动相A：99％水-1％乙腈-0.1％九氟戊酸；流动相B：10％水-90％乙腈-0.1％九氟戊酸；流动相梯度为：<img file="FSB00000722501200021.GIF" wi="899" he="1462" />所述应用的电喷雾串联质谱条件为：氮气压力：0.64MPa；氦气压力：0.38MPa；极性：正电离；扫描形式：全扫描；采集时间：40min；激活时间：30ms；吹扫气：0LTQ单位；喷雾电压：5kV；毛细管温度：350℃；扫描范围：标准；扫描速率：标准；分段、分段时间、离子变换、分离宽度、归一化碰撞能量、激活Q、扫描范围条件设置为：<img file="FSB00000722501200022.GIF" wi="2018" he="407" /><img file="FSB00000722501200031.GIF" wi="1894" he="1297" />其中第3分段的鞘气和辅助气分别为38LTQ单位和0LTQ单位，其余分段的鞘气和辅助气分别为46LTQ单位和19LTQ单位；其他参数由自动调谐确定或依照LTQ质谱的默认设置；所述应用的标准曲线制作方法如下：采用内标法定量，配制含内标正缬氨酸浓度为1.7μM的氨基酸混和标准溶液I，所述标准溶液I为含天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)、谷氨酰胺(Gln)、苏氨酸(Thr)、谷氨酸(Glu)、胱氨酸(Cys)、γ-氨基丁酸(Gaba)、哌啶酸(Pip)、缬氨酸(Val)、甲硫氨基酸(Met)、组氨酸(His)、酪氨酸(Tyr)、赖氨酸(Lys)、异亮氨酸(Ile)、精氨酸(Arg)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Try)的浓度均为50μM的0.03M HCl溶液；配制含内标正缬氨酸浓度为1.7μM的氨基酸混和标准溶液II，所述标准溶液II为含脯氨酸(Pro)和天冬酰胺(Asn)的浓度分别为500μM的0.03M HCl溶液；用含正缬氨酸浓度为1.7μM的0.03MHCl把标准溶液I和标准溶液II配成系列浓度，制作标准曲线；所述应用的样品处理方法为：称取0.1～0.2g烟末置于锥形瓶中，加入20mL含正缬氨酸浓度为1.7μM的0.03MHCl溶液，超声震荡15min，摇荡锥形瓶片刻使溶液浓度分配均匀，经0.2μm滤膜过滤后直接进样。 |
