用于多重连接扩增技术的长探针的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于多重连接扩增技术的长探针的制备方法，包括以下步骤：1)与待检测靶片段无关的模板核苷酸序列选择，并根据UT和目标核苷酸序列设计引物；2)人工合成引物；3)PCR扩增；4)PCR产物与亲和素磁珠混合；5)PCR产物变性解链；6)分离非生物素标记的单链核苷酸序列，即得到可用于多重连接扩增技术的长探针。本发明所述MLPA长探针的制备方法利用简单的PCR扩增和亲和素磁珠结合过程即可获得MLPA长探针，操作步骤简单容易，避免了进行噬菌体感染等获取长探针的耗时长且复杂的操作过程，大大降低了进行MLPA技术应用的门槛，使得普通的实验室也能顺利地进行该项实验。

主权项

用于多重连接扩增技术的长探针的制备方法，包括以下步骤：1)针对目标核苷酸序列和用于制备长探针的与待检测靶片段无关的模板核苷酸序列设计一对PCR扩增引物，分别为通用引物和检测引物；所述检测引物由两段核苷酸序列组成，一段根据目标核苷酸序列设计，另一段根据与待检测靶片段无关的模板核苷酸序列设计；2)在通用引物的5’端标记生物素；3)以所述与待检测靶片段无关的模板核苷酸序列为模板进行PCR扩增，获得生物素标记的双链核苷酸序列；4)将所述生物素标记的双链核苷酸序列与亲和素磁珠混合；5)使生物素标记的双链核苷酸序列变性，解链形成单链；6)离心，取上清，获得非生物素标记的单链核苷酸序列。