松材线虫的冷冻保存及解冻方法

摘要

本发明公开了一种松材线虫的冷冻保存及解冻方法，属于线虫的冷冻保存领域。本发明方法包括以下步骤：（1）预处理松材线虫悬液；（2）预处理后的松材线虫悬液中加入冷冻保护剂，平衡处理；（3）平衡处理后的松材线虫悬液程序化降温后冷冻保存；（4）解冻复苏；所述的程序化降温的程序如下：以1℃/min的降温速率将松材线虫悬液从4℃降温至-6℃；再以20℃/min的降温速率降温至-40℃;以10℃/min的升温速率升温至-20℃；最后以1-0.5℃/min的速率将松材线虫悬液降温至-45℃后投入液氮中保存。本发明冷冻保存及解冻方法能显著提高松材线虫的存活率和繁殖能力，能适用于不同株系松材线虫的冷冻保存。

主权项

一种松材线虫(Bursaphelenchus xyfolus)的程序化冷冻保存及解冻方法，包括以下步骤：（1）预处理松材线虫悬液；（2）预处理后的松材线虫悬液中加入冷冻保护剂，平衡处理；（3）平衡处理后的松材线虫悬液程序化降温后冷冻保存；（4）解冻复苏；其特征在于，所述的程序化降温的程序如下：以1℃/min的降温速率将平衡处理后的松材线虫悬液从4℃降温至‑6℃；再以20℃/min的降温速率降温至‑40℃；以10℃/min的升温速率升温至‑20℃；最后以1‑0.5℃/min的降温速率将松材线虫悬液从‑20℃降温至‑45℃后迅速投入液氮中进行冷冻保存。