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一种诱导提高丹参悬浮培养细胞中丹酚酸Ｂ产量的方法，具体包括以下步骤：1）培养无菌苗步骤；2）诱导愈伤组织步骤；3）愈伤组织继代培养步骤；4）愈伤组织悬浮培养步骤；5）诱导产生丹酚酸B步骤；6）收获培养细胞步骤；所述培养无菌苗步骤是将新鲜的丹参种子用水冲洗2~4 h，用纱布去除表面的蜡质层，再用水冲洗3次，进行灭菌处理后用70%乙醇中冲泡30 s，无菌水冲洗3次，再用0.1%的HgCl2溶液中灭菌10~15 min，再用无菌水冲洗3次后，接种在MS固体培养基上，在培养温度为23～27℃、光照时间为10~12 h、光照强度为2000~3000 Lx的条件下培养2个月，长出无菌苗；所述诱导愈伤组织步骤是取出生长2个月的无菌苗，将叶片剪成0.5 cm × 0.5 cm的小块，接种于MS固体诱导培养基上诱导形成愈伤组织；所述愈伤组织继代培养步骤是将诱导出的愈伤组织每20 d继代培养一次，继代培养3次后形成具有稳定形态特征和生长速率的愈伤组织，然后在培养温度为23～27℃、光照时间为12~16 h、光照强度为2000~3000 Lx的培养条件下培养1个月，待用；所述愈伤组织悬浮培养步骤是选择新鲜疏松的固体愈伤组织，在无菌状态下分散，进行悬浮培养； 5）所述诱导产生丹酚酸B步骤是当培养细胞生长接近静止期时，向培养基中加入终浓度为6.25~25 mg/L的水杨酸诱导子进行诱导培养；6）所述收获培养细胞步骤是收集全部培养液，置离心管中，在1200×g 离心后，倾倒出上清的培养基，收集沉淀培养细胞，将培养细胞在40~60℃真空干燥箱中干燥至恒量。 |
