一种酶电极的制备及快速检测植物油过氧化值的方法

摘要

本发明属食品检测领域，具体涉及一种酶电极的制备及快速检测植物油过氧化值的方法，它包括选用玻碳电极，先制备Nafion-亚甲基蓝膜电极，然后采用牛血清白蛋白-戊二醛交联方法固定辣根过氧化物酶，得到最终辣根过氧化物酶电极，然后用该电极快速检测植物油的过氧化值。该方法灵敏度高、选择性好、精确度高、响应时间短、干扰少，优于传统的碘量滴定法，是一种简捷快速、方便易行的过氧化值测定方法，具有实现自动化现场测定的潜力。

主权项

一种酶电极的制备方法，其特征是，它包括以下步骤：a.电极预处理将玻碳电极(Glass Carbon Electrode)用Al2O3粉研磨抛光，用二次蒸馏水润湿，接着进行超声清洗处理，然后再用二次蒸馏水和丙酮冲洗除去其表面吸附物质，使其成镜面；然后将玻碳电极浸入浓度为0.2mol/L的硫酸溶液中，用PAR 270电化学工作站进行循环伏安法扫描处理，扫描速度为50m V/s，电压范围为‑0.5～+1.5V，持续扫描10min，得到稳定的循环伏安图后，取出玻碳电极，然后用二次蒸馏水洗净，室温干燥后备用；b.辣根过氧化物酶Nafion膜修饰的玻碳电极的制备：首先，将5％的Nafion溶液用纯甲醇稀释至0.3％，然后用微量注射器吸取2～10μl的Nafion和甲醇的混合溶液均匀地滴加到步骤a的玻碳电极的表面，然后用红外干燥器烘干蒸发掉溶剂甲醇，在电极表面形成一薄层Nafion膜，得到Nafion膜电极；其次，配制浓度为1×10‑4mol/L的亚甲基蓝(MB)溶液，然后将Nafion膜电极浸入到亚甲基蓝溶液中，保持10min，通过离子交换，将亚甲基蓝固定到Nafion的膜电极内，得Nafion‑亚甲基蓝膜电极；然后，采用牛血清白蛋白‑戊二醛交联方法固定辣根过氧化物酶(HRP)，配制均匀混合液10ml，所述混合液由下述物质组成：二次蒸馏水10ml、牛血清白蛋白400mg、辣根过氧化物酶5～100mg以及戊二醛156mg；准确吸取10μl的混合溶液均匀滴加到上述的Nafion‑亚甲基蓝膜电极表面，在室温下放置2h，等水分蒸发后，即形成辣根过氧化物酶Nafion膜修饰电极(Nafion/MB/HRP电极)，即得本发明的酶电极，将制备好的酶电极在4℃温度下保存备用。