植物基因组DNA的循环提取方法

摘要

本发明公开了一种植物基因组DNA的循环提取方法，涉及分子生物学实验中植物基因组DNA分离提取技术。传统基因组DNA提取步骤主要包括细胞的破碎、非DNA成分的抽提、DNA的析出、离子的去除、DNA的干燥和溶解。本方法在传统基因组DNA提取步骤基础上增加了组织样品循环提取的步骤。具体是指1份组织样可先后加入4次DNA提取液，进行4次基因组DNA的分离过程，得到4次基因组DNA样品。本方法适用的植物物种范围较广；能从植物叶片，尤其是成熟叶片中提取到高产量的基因组DNA。

主权项

一种植物基因组DNA的循环提取方法，其特征在于包括如下步骤：①将植物组织样品在液氮速冻下磨成细粉后，取0.3g转入2mL离心管中；②加入500μl预热的3％CTAB提取液，充分混匀，65℃水浴40min；③12000rpm常温离心15min，转移上清液到新的1.5mL离心管中，加入100μl的24∶1的氯仿‑异戊醇，充分混匀后，常温12000rpm离心15min，抽提1～2次，抽提后的上清液转入新的离心管中，加入两倍体积的提前预冷到‑20℃的100％酒精；放置于‑20℃冰柜30min，让DNA沉淀充分析出，将析出的DNA沉淀转移到含有1mL70％酒精的1.5mL离心管中，漂洗1～2次，每次30min，倒干酒精，待DNA沉淀干燥后，用100μl的T0.1E充分溶解，并用1μl浓度为10μg/mLRNA酶37℃消化30min，该过程得到的DNA样品，称为1stDNA；④步骤③中转移上清液后离心管底部的组织样品，继续加入500μl的3％CTAB提取液进行提取，该组织样共循环提取4次，依此又得到3批次DNA样品，分别称为2ndDNA、3rdDNA和4thDNA。