恶臭假单胞菌KT2440高效电转化方法

摘要

本发明涉及恶臭假单胞菌KT2440(Pseudomonasputida KT2440)高效电转化方法。该方法是：以EM培养基，30℃培养菌体至OD 600为0.6-0.75，3mM 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES，pH＝7.0)缓冲液洗涤并悬浮菌体，电转化条件：1.2kV，200Ω，25μF；电转化后加1ml SOC培养基，在15ml聚丙烯离心管中，30℃培养2h。利用本发明的方法转化效率可达3.0×10 8/μg，比现有技术效率高出30倍左右。高效的电转化效率可以保证外源基因高效的转化至菌株；保证大分子量质粒DNA也可以高效电转化；在需要高效率转化时，如随机文库的转化时尤为关键。本发明也可为高效转化其它假单胞杆菌提供借鉴。

主权项

一种恶臭假单胞菌KT2440高效电转化方法，其特征在于，以EM培养基，30℃培养菌体至OD600为0.6‑0.75，用3mM、pH＝7.0的4‑羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液洗涤并悬浮菌体后，菌体浓缩300倍，50ul分装；在1.2KV，200Ω，25μF条件下进行电转化；电转化后向电转化液中加1ml SOC培养基，在15ml聚丙烯离心管中，温育30℃培养2h；其中所说的EM培养基的配方是，以每升计：蛋白胨20.0g，酵母膏5.0g，氯化钠5.0g，葡萄糖5.0g，pH＝7.0；其中所说的SOC培养基的配方以每升计：蛋白胨20.0g，酵母膏5.0g，氯化钠10mM，氯化钾2.5mM，氯化镁10mM，硫酸镁10mM和葡萄糖20mM。