血清miRNA-483-5p的定量检测方法

摘要

血清miRNA-483-5p的定量检测方法，涉及一种血清的检测方法。取待检测血清与裂解液混合，裂解后用酚氯法析出RNA并回收小片段RNA；取纯化miRNA在MMLV酶催化下应用特定引物将miRNA变为cDNA，然后将cDNA在EXtaq酶催化下应用miRNA-483-5p的PCR引物和探针进行定量PCR检测，每循环在70℃时检测FAM荧光值，完成循环后分析数据与标准品比较得出定量值。系统完整地验证了从引物、探针设计、各种催化酶的使用到外参定量方法，解决了血清中内参不稳定导致定量不准确的弊端，有望将此发明应用于临床，并对今后血清中miRNA作为各种疾病的生物标记这一热门研究起到引导作用。

主权项

血清miRNA‑483‑5p的定量检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)取待检测血清与裂解液混合，裂解后用酚氯法析出RNA并回收小片段RNA；2)取纯化miRNA在MMLV酶催化下应用特定引物将miRNA变为cDNA，然后将cDNA在EXtaq酶催化下应用miRNA‑483‑5p的PCR引物和探针进行定量PCR检测，条件为95℃10min后进行40循环95℃10s，60℃10s，70℃10s，每循环在70℃时检测FAM荧光值，完成循环后分析数据与标准品比较得出定量值；所述miRNA‑483‑5p的PCR引物和探针如下表：所示。