主权项 |
温郁金1号的组织培养法,其特征是依次包括以下步骤:1)、将无病斑、无虫瘿且健壮饱满的温郁金1号块根放入生化培养箱进行催芽,直至长成0.5~2.0cm高的小芽;培养条件为:26~28℃暗培养;2)、割取上述小芽进行流水冲洗;3)、将上述流水冲洗后的小芽经常规消毒后,剥取3~5毫米大小的茎尖作为外植体接种到无菌苗培养基上进行培养;培养条件为:16小时光照,光照强度30~40μmol·m‑2·s‑1,温度为27±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照和暗培养交替进行;所述无菌苗培养基为:1/2MS基本培养基+白砂糖20~30g/l+琼脂4~9g/l,pH为5.5~6.0;4)、待上述茎尖长至1.0~2.0cm高时进行割取作为小苗I;将上述小苗I接种到不定芽诱导培养基上进行培养;培养条件为:16小时光照,光照强度30~40μmol·m‑2·s‑1,温度为27±1℃;8小时暗培养,温度为21±1℃;上述光照利暗培养交替进行;所述不定芽诱导培养基为:MS基本培养基+TDZ 0.05~0.5mg/l+白砂糖20~30g/l+琼脂4~9g/l,pH为5.5~6.0;5)、待从小苗I上诱导出的不定芽I长到1.0~3.0cm高时,割取所述不定芽I作为小苗II;将上述小苗II接种到增殖培养基上进行培养;培养条件为:16小时光照,光照强度30~40μmol·m‑2·s‑1,温度为26~28℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行;所述增殖培养基为:MS基本培养基+TDZ 0.05~0.5mg/l+白砂糖20~30g/l+琼脂4~9g/l,pH为5.5~6.0;6)、待上述小苗II上长出的不定芽II长到3.0~6.0cm高时,割取所述不定芽II作为小苗III;将此小苗III接种到生根培养基中;培养条件为:16小时光照,光照强度40~50μmol·m‑2·s‑1,温度为26~28℃;8小时暗培养,温度为20~22℃;上述光照和暗培养交替进行;所述生根培养基为:1/2MS基本培养基+白砂糖15~20g/l+琼脂4~10g/l,pH为5.5~6.0;7)待上述小苗III长到高4~8cm且具有至少3条长于2cm的根时,得到出瓶种植的种苗。 |