一种普洱茶熟茶中微生物的快速分离方法

摘要

本发明涉及一种普洱茶熟茶中微生物的快速分离方法，具体为普洱茶熟茶中产闭囊壳(俗称“金花”)微生物的快速分离方法，属普洱茶发酵有益微生物分离培养技术领域。根据“金花”出现的环境条件分析，对其分离用培养基利用正交优化试验方法确定后，进一步比较完善后，并对培养条件进行比较研究后确定基本培养条件，从而使“产闭囊壳菌”在平板上菌落扩展快，菌落大，气生菌丝发育良好，缩短无性阶段，促进有性繁殖结构——黄色子囊果闭囊壳(俗称“金花”)的产生，达到快速分离、培养增殖的目的要求。方法包括培养基的制备、平板分离培养条件确定、茶样分离及微生物的确认。本发明具有快捷、简便、针对性强、分离成功率高的特点。

主权项

一种普洱茶熟茶中微生物的快速分离方法，其特征在于该分离培养方法包括如下步骤：1.1培养基的制备分离纯化培养基：20％马铃薯浸汁1000mL；10g酵母浸出物；葡萄糖140g；琼脂20g；121.3℃，15分钟灭菌后，制备分离用培养平板；闭囊壳产生培养基：茶叶50g，加入30mL的水，装入500mL三角瓶包扎，121.3℃，15分钟灭菌后备用；1.2平板分离培养条件培养温度：25℃；培养时间：7天；湿度控制在70％以上，通过对平板进行包裹制造相对缺氧环境；1.3茶样分离a、将普洱紧压熟茶用无菌工具以常规的无菌操作方式剥离，露出中心部位，用无菌工具将子囊果——闭囊壳挑于无菌水中制备成悬液，然后按十倍梯度稀释，在分离纯化培养基上以常规方法进行平板涂布分离，在25℃的温度下培养7天，挑取黄色颗粒明显的单菌落保存备用；b、将普洱紧压熟茶用无菌工具以常规的无菌操作方式剥离，露出中心部位，用无菌工具挑取子囊果——闭囊壳后轻磕器皿边，使之播撒于分离纯化培养基分离平板上，在25℃的温度下培养7天，挑取黄色颗粒明显的单菌落保存备用；1.4产闭囊壳微生物的确认将分离得到的黄色颗粒明显的单菌落微生物接种于闭囊壳产生培养基上，25℃的温度下培养10天，出现明显黄色颗粒，经显微观察后和普洱茶分离样品中黄色颗粒形态结构相同。