一种黄芩中黄酮苷的制备方法

摘要

本发明提供了一种黄芩中黄酮苷类化合物的制备方法，该方法适用于包括黄芩苷、汉黄芩苷、白杨素-6-C-α-L-阿拉伯糖苷-8-C-β-D-葡萄糖苷和木蝴蝶素A-7-O-葡萄糖醛酸苷在内的四种黄酮苷的快速制备。其制备方法是将黄芩药材粉碎后加水提取，先后乙醇醇沉，高速离心，再通过膜分离后，非极性大孔吸附树脂上样，乙醇/水洗脱，收集洗脱液并浓缩干燥后得到黄芩大孔树脂组分，再通过平行制备液相色谱分离，乙腈水作流动相，获得黄芩有效成分。本发明选择性好、所得化合物纯度高，且大大提高了分离纯化效率。制备过程重复性高和可操作性好，易于实现标准化和产业化，对快速获取黄芩中的黄酮类活性成分具有一定的指导意义。

主权项

一种黄芩中黄酮苷的制备方法，其特征在于：1)样品前处理：称取原药材黄芩，加水煎煮提取2‑3次，得到黄芩提取液，将提取液浓缩成浸膏后依次进行醇沉、高速离心和膜分离处理后得到膜分离组分，将膜分离组分上样于非极性大孔树脂柱，分别采用不同体积浓度的乙醇洗脱，洗脱液浓缩，得黄芩大孔树脂分离组分；2)平行制备液相色谱分离：采用2‑6个通道的平行制备液相色谱，以粒径3‑10微米的ODS系列中的固定相为色谱填料，以乙腈和水为流动相，梯度洗脱，乙腈的体积浓度从0‑100％变化，对黄芩大孔树脂分离组分进行纯化分离，采用DAD实时监控，共收集到四个不同的目标组分，浓缩处理即得黄酮苷类化合物，它们分别为黄芩苷、汉黄芩苷、白杨素‑6‑C‑α‑L‑阿拉伯糖‑8‑C‑β‑D‑葡萄糖苷和木蝴蝶素A‑7‑O‑葡萄糖醛酸苷；加水煎煮提取2‑3次的过程是指，将黄芩加入其重量6‑10倍的水煎煮提取1‑3小时，过滤得到提取液；煎煮提取和过滤过程重复2‑3次，合并提取液，将提取液浓缩至相对密度为0.9‑1.10的浸膏，得到黄芩水提组分；所述浸膏至膜分离组分过程是指于浸膏中加入乙醇，使乙醇体积浓度达到50‑70％，室温静置12‑24小时，过滤，滤渣弃去，取滤液浓缩，滤液浓缩至相对密度1.05‑1.10；于所得浓缩物中再加入乙醇使乙醇体积浓度达到75‑85％，室温静置12‑24小时过滤，滤渣弃去，取滤液浓缩挥发除去乙醇，样品溶液经过10000‑25000转/分钟的高速离心机离心，得到黄芩醇沉组分；此醇沉组分再通过3000‑6000Da的膜分离，得到膜分离组分；所述非极性大孔树脂分离过程为，将黄芩的膜分离组分上样于非极性大孔树脂柱，上样量与分离材料体积比为1∶100‑500，分别采用流动相体积浓度5‑15％和30‑60％乙醇洗脱，每次洗脱的体积为3‑5个柱体积，流速为1‑3个柱体积/小时；循环洗脱，收集采用体积浓度为30‑60％的乙醇洗脱时的洗脱液，洗脱液浓缩，即为黄芩大孔树脂分离组分；所述平行制备液相色谱的柱效为50000‑150000塔板/米；色谱柱长为100‑300毫米，色谱柱内径为5‑50毫米。