同时制备淫羊藿苷、朝藿定A、B、C化学对照品的方法

摘要

本发明涉及一种同时制备淫羊藿苷、朝藿定A、B、C化学对照品的分离制备方法。以含量为10％-50％的淫羊藿苷提取物为原料，经初步柱分离，以制备型高效液相色谱为主要分离手段，通过两步高效液相制备，提取液直接减压浓缩至干即可获得纯度大于98％的朝藿定A、B、C和淫羊藿苷化学对照品。本发明工艺步骤简单、纯度高、色泽好，并且可大规模生产。

主权项

同时制备淫羊藿苷、朝藿定A、B、C化学对照品的方法，其特征在于：以质量含量为10％‑50％的淫羊藿苷提取物为原料，经初步柱分离，以制备型高效液相色谱为主要分离手段，通过两步高效液相制备，提取液直接减压浓缩至干即可获得纯度大于98％的相应对照品；具体步骤如下：1)初步柱分离：淫羊藿苷提取物用水或体积浓度40‑80％乙醇水溶液溶解，树脂柱或聚酰胺柱分离，乙醇‑水溶液梯度洗脱，其中乙醇的体积浓度从0％‑100％变化，收集20％‑80％乙醇洗脱物，浓缩干燥得黄色粉末I；2)第一步高效液相制备：黄色粉末I用体积浓度40‑80％乙醇水溶液溶解，配置成浓度为50～150mg/ml的供试品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤；采用柱长10‑50cm、直径1‑10cm的高效液相制备色谱柱进行分离，六通阀或泵进样，进样体积为1‑50ml，以体积浓度为45‑60％的甲醇‑水或体积浓度为20‑40％的乙腈‑水溶液为洗脱体系，流速控制在10‑400ml/min，在线紫外检测，分别收集含有朝藿定A和B的洗脱液，其为流份1；含有朝藿定C和淫羊藿苷的洗脱液，其为流份2，以上两个流份分别干燥得黄色粉末II和黄色粉末III；3)第二步高效液相制备：黄色粉末II以体积浓度为20‑40％的含乙腈水溶液为洗脱体系进行第二次高效液相制备，其余条件同步骤2)，分别收集纯度＞98％的朝藿定A流份和纯度＞98％的朝藿定B的流份。黄色粉末III以体积浓度为20‑40％的含乙腈水溶液为洗脱体系进行第二次高效液相制备，其余条件同步骤2)，分别收集纯度大于98％的含有朝藿定C和淫羊藿苷的高纯流份；4)目标化学对照品的获得：以上四种高纯流份直接浓缩至干即可得到纯度大于98％的相应对照品，其为亮黄色粉末；第一步或第二步高效液相制备过程采用的制备柱的填料为C6、C8、或C18键合相填料，粒径为5‑20μm。