15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的生物制备方法

摘要

本发明涉及一种15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的生物制备方法，步骤是：(1)将雷斯青霉Penicillium raistrickii(ATCC 10490)菌种接种于斜面培养基，制备出菌悬液；(2)一级种子培养；(3)二级发酵培养；(4)添加底物诱导；(5)进行左旋乙基甾烯双酮转化；(6)萃取制备成品。本发明采用的微生物转化方法具有很高的立体选择性、区域选择性和化学选择性，提高了底物转化率，在3‰投料量情况下，其转化率最高可达90％以上，简化了目标产物制备与纯化的过程，避免大量有机溶剂的使用，既符合环保要求，又降低生产成本。

主权项

一种15α羟基化左旋乙基甾烯双酮的生物制备方法，其特征在于：制备方法的步骤是；(1)菌悬液的制备：将雷斯青霉Penicillium raistrickii ATCC 10490菌种接种于斜面培养基，5天后，用无菌生理盐水制备出菌悬液；(2)一级种子培养：将菌悬液接入种子培养基培养，接种量106‑109个/mL，培养温度为25‑30℃，转速80‑120r/s，培养时间24‑96h，得到种子培养液；(3)二级发酵培养：将种子培养液以2‑5％的接种量接入发酵罐继续培养，发酵控制条件为温度25‑30℃，转速160‑240r/min，通气量为2L/min，菌体培养时间为36‑72h，得到发酵液；(4)底物诱导；在已培养好的发酵液内加入0.1‑0.3g/L的左旋乙基甾烯双酮诱导16‑48h小时；(5)左旋乙基甾烯双酮转化：加入底物进行微生物转化，采用将左旋乙基甾烯双酮底物用促溶剂溶解后加入发酵液的转化方式，转化条件为转速180‑240r/min，转化温度为25‑30℃，转化时间90‑150h；(6)萃取制备成品：料液经过滤，所得滤饼经萃取处理，即得15α羟基化左旋乙基甾烯双酮，所述促溶剂包括甲醇、乙醇、丙二醇、甘油、1，3‑丁二醇、聚乙二醇、苯甲醇二甲亚砜、二甲基甲酰胺、丙酮、二甲基乙酰胺、乳酸乙酯、油酸乙酯，促溶剂浓度1‑6％。