一种冬虫夏草的培育方法

摘要

本发明公开了一种冬虫夏草的培育方法，以青海野生冬虫夏草为出发菌株，经分离培养、扩大培养、液体培养制的冬虫夏草液体菌种，将液体菌种接种到2龄蝙蝠幼虫体上经床架式栽培或瓶式栽培获得冬虫夏草。本发明解决了现有技术人工不能栽培冬虫夏草的技术问题。

主权项

一种冬虫夏草的培育方法，其特征在于包括以下步骤：第一步、冬虫夏草一级母种斜面培养：1、培养基配方：土豆200克、麦皮50克、磷酸二氢钾2克、葡萄糖20克、蛋白胨10克、链霉素0.5克、琼脂20克、维生素B 4片、水1000毫升；2、配制方法：将洗净去皮的土豆切成薄片加水1000毫升煮沸30分钟，至土豆软而不烂时，用4层纱布虑去土豆残渣，取汁液于锅中加入琼脂20克、蛋白胨10克、磷酸二氢钾2克、维生素B4片、链霉素0.5克、葡萄糖20克、麦皮50克并搅拌均匀，继续加热至琼脂完全溶化，趁热迅速分装试管，每个试管装培养基的量与试管的体积比是1∶5，装完后塞上棉塞，然后把试管每10支扎成一捆，用牛皮纸包好放入高压锅灭菌，加热到压力达到0.5Kg/m2时，开排气阀，排出冷空气，使指针回到0点，然后关上排气阀继续加热至121℃时保压40分钟出锅，并趁热把试管摆成斜面，冷却后得固体试管斜面备用；3、菌种分离培养：将新鲜健壮的子座在8厘米长的青海野生冬虫夏草清洗后用质量百分比为0.1％升汞溶液对其进行消毒处理，再用无菌水清除其表面的升汞，冬虫夏草表面消毒处理后，用无菌刀片切去冬虫夏草子座的外层，用接种刀切取其内部组织1立方毫米的小块迅速移接到试管斜面上，并迅速塞上棉塞，然后放入20‑28℃的恒温箱中培养15‑20天即得冬虫夏草一级母种斜面；第二步、冬虫夏草二级母种斜面的扩大培养： 将分离的一级母种斜面试管再进行扩大培养，得二级母种斜面试管，二级母种斜面试管的培养基与一级母种斜面试管的培养基相同，移接时严格无菌操作，一支一级母种斜面试管移接20‑30支二级母种斜面试管，接种完毕后放入20‑28℃的恒温箱中培养10‑15天即得冬虫夏草二级母种斜面；第三步、冬虫夏草液体菌种的培养：1、培养基配方：玉米250克、蛋白胨25克、酵母粉2.5克、磷酸二氢钾2.5克、维生素B15片、链霉素2.5克、硫酸镁1克、葡萄糖40克、水2500毫升；2、配制方法：将玉米用清水洗净放入锅内加水2500毫升煮沸30分钟，冷却后用四层纱布过滤去渣，取其汁液于锅中，加蛋白胨25克、酵母粉2.5克、磷酸二氢钾2.5克、维生素B15片、链霉素2.5克、硫酸镁1克、葡萄糖40克，然后加热至全部溶化，冷却后分装在500毫升盐水瓶内，每瓶装液量250毫升，用棉塞塞紧封口后在高压锅内灭菌，温度达到121℃时保压2小时出锅，冷却后连同冬虫夏草二级母种斜面一同放入无菌箱中，准备转接；3、液体菌种的培养：转接过程中严格遵守无菌操作规程，转接过程是将斜面试管中已长成的冬虫夏草母种转接到液体培养基中，接种时，要去掉母种块上的琼脂，使母种块漂浮在盐水瓶中的液体培养液上面，接种后放到恒温箱里在20‑28℃，恒温培养2‑3天，待液体菌种培养液面上的母种块长到直径为2.5cm的菌块时，就将盐水瓶转移到摇瓶机上在20‑28℃振荡培养7‑14天，得冬虫夏草液体菌种；第四步、冬虫夏草的栽培： 1、栽培场地的选择：要选择背风向阳、地高阔、周围环境清洁、无污染源、有清洁水源、排水方便的地建饲养室和栽培棚，方位坐北朝南，饲养室要和栽培棚连在一起，便于管理；2、蝙蝠蛾虫的饲养：饲养蝙蝠蛾虫要在无菌饲养室饲养，要求：饲养室的温度是25℃‑28℃，湿度是90％，并保持黑暗或微光照条件，蝙蝠蛾虫的食物是高粱、胡萝卜和土豆，或人工用麸皮50克、土豆淀粉10克、脱脂大豆粉25克、干桑叶粉20克、蔗糖5克、金霉素0.1克、山梨酸0.3克、抗坏血酸1.5克、蒸溜水250毫升按比例制备的配合饲料，饲养室要定期灭菌、消毒、搞好清洁卫生，饲养5‑8个月后蝙蝠蛾虫既产二代蝙蝠幼虫，二代蝙蝠幼虫生长30天即得2龄蝙蝠幼虫；3、冬虫夏草的栽培：栽培棚要选择含沙量质量比为50％的泥土、通气性能良好的土地建立温室大棚，温室大棚坐北朝南，要用玻璃窗，栽培方式有床架式栽培和瓶式栽培两种，所述床架式栽培的工艺步骤如下：(1)、栽培床架土垄的制备：大棚内设置有多层培养床架，每层高度12‑20厘米，宽度1.2‑1.5米，长度与温室大棚相应，培养床架的顶层距棚顶1米高，各床架之间留有0.8米宽的通道，好便于管理；在床架的各层上填装培养土，要求土层厚度8厘米，培养土由河沙50Kg、菜园土30Kg、黄泥松土10Kg、人工配合饲料10Kg按比例混合搅拌而成，调节土壤pH值为6‑7，湿度为40‑60％，然后把培养土做成垄；(2)、接种：把培养好的冬虫夏草液体菌种，装入消过毒的小喷雾器内， 在晚上7点半至9点半期间均匀的把液体菌种喷洒到2龄蝙蝠幼虫上，每隔8‑10小时喷一次，连喷2‑3次，接种成功率较高，为了提高接种成功率，在幼虫的食物中混入冬虫夏草菌丝体，接种完毕后，再将2龄蝙蝠幼虫放进培养床架的土垄上，让它边吃食边往土内钻，每平方米放2龄蝙蝠幼虫150‑200只，放虫后上面用树叶或薄膜盖好；(3)、接种后的管理：接种后要注意观察2龄蝙蝠幼虫的活动情况，并要防止蚁、蟑螂的危害，7‑10天后，幼虫就开始感染上虫草菌，被感染的幼虫，体色由深褐色渐变为淡黄色，而且爬行缓慢，最后全身布满灰白色菌丝而僵化死亡，接种后1个月内调节室温为10℃‑20℃，空气相对湿度为50％‑60％，1‑1.5个月内，调节温度在14℃‑25℃，空气湿度60％‑70％，1个半月以后，幼虫头部萌发子实体时，调节温度在26℃‑32℃，湿度为70％‑80％，每天开门窗通风2小时，以利于虫草子实体的生长发育，再经1‑2个月后，子座可长到10‑12厘米高，粗1.5‑5毫米棍棒状，颜色为黄褐色，即成熟，便可采收。