主权项 |
一种杂交鹅掌楸体胚发生同步化控制方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)在无菌条件下,按接种量为2g/50ml将保存在固体培养基上的胚性愈伤组织接入液体诱导培养基I,增殖培养,控温25±2℃,在转速为95r·min‑1的摇床上暗培养2~3周,获得初始材料;其中,每周继代一次,继代按体积比为1∶9将培养物接入液体诱导培养基I,液体诱导培养基I的配方为:MS培养基,2mg·L‑12,4‑D,0.2mg·L‑16‑BA,500mg·L‑1LH,30g·L‑1蔗糖;(2)按体积比为1∶9将步骤(1)获得的初始材料接入液体诱导培养基II,控温25±2℃,在转速为95r·min‑1的摇床上暗培养7~9d,获得悬浮培养物;其中,液体诱导培养基II的配方为:MS培养基,0.2mg·L‑12,4‑D,0.5mg·L‑1KT,200mg·L‑1CH,50g·L‑1蔗糖;(3)将步骤(2)悬浮培养物过孔径400μm、280μm、150μm、38μm网筛,并按不同孔径分层收集细胞,分别铺于滤纸上,然后置于半固体成熟培养基上培养2~5周后获得同步的成熟胚;其中,半固体成熟培养基的配方为:MS培养基,2~10mg·L‑1ABA,2g·L‑1AC,100mg·L‑1CH,40g·L‑1蔗糖,5g·L‑1琼脂;(4)将成熟胚转移至生长培养基上促进萌发生长,将萌发的小植株转至植株生长培养基上培养,即获得再生植株;其中,生长培养基配方为:MS培养基,1mg·L‑1ABA,30g·L‑1蔗糖,6.5g·L‑1琼脂;植株生长培养基配方为:MS培养基,30g·L‑1蔗糖,6.5g·L‑1琼脂;培养条件均为:25±2℃,光照16h/黑暗8h培养。 |