结合藻红胆素的藻蓝蛋白荧光探针的制备方法

摘要

本发明公开了一种结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质的制备方法，通过应用藻胆蛋白beta裂合酶催化藻红胆素与藻蓝蛋白类脱辅基蛋白共价结合，制备结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；本发明的方法应用生物过程生产新型的藻蓝蛋白类荧光蛋白质，是一种环境友好的生产方法；藻蓝蛋白类荧光蛋白质能应用于食品、保健与医药功能材料领域，特别是应用为生物和医学分子监测领域的荧光探针。

主权项

一种结合藻红胆素的藻蓝蛋白荧光探针的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)用基因工程方法将Anabaena sp.PCC7120中的beta裂合酶基因alr0617克隆于表达载体，得到beta裂合酶表达质粒；(2)用基因工程方法将Anabaena sp.PCC7120或M.laminosus sp.PCC7603中的藻蓝蛋白类脱辅基蛋白基因cpcB克隆于第二个表达载体中，得到脱辅基蛋白表达质粒；(3)用基因工程方法将Anabaena sp.PCC7120中的藻红胆素生物合成酶基因ho1和Calothrix sp.PCC7601中的藻红胆素生物合成酶基因pebB克隆于第三个表达载体中，得到ho1和pebB表达质粒；(4)用基因工程方法将Calothrix sp.PCC7601中的藻红胆素生物合成酶基因pebA克隆于第四个表达载体中，得到pebA表达质粒；(5)将beta裂合酶表达质粒，脱辅基蛋白表达质粒、ho1和pebB表达质粒和pebA表达质粒依次转入配套的宿主菌，当这些表达质粒都转入宿主菌后，得到相应的工程菌，应用此工程菌通过发酵工程能生产结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质；发酵后，按常规蛋白质提纯技术，提纯得到相应的结合藻红胆素的藻蓝蛋白类荧光蛋白质。