MLPA长探针制备方法、转基因玉米MLPA长探针及检测方法

摘要

本发明涉及核酸分子检测领域，具体公开了一种MLPA长探针的制备方法、转基因玉米MLPA长探针和短探针以及转基因玉米的MLPA检测方法。本发明的MLPA长探针制备方法采用不对称PCR扩增、酶切、凝胶电泳及切胶回收等实验室常规技术就可以进行。与现有的制备方法相比，操作简单、成本低廉，在一般的实验室均可操作；解决了由于长探针制备困难、成本高昂造成的MLPA检测方法应用受限的问题。本发明的转基因玉米MLPA长探针和短探针可以用于转基因玉米的检测，为转基因玉米的高通量MLPA检测提供了基础。在此基础上进行的转基因玉米MLPA检测方法，其扩展性能好、特异性强，为转基因玉米检测提供了一种简单、方便、有效、可靠的高通量检测方法，特别适合用于检验检疫等部门。

主权项

一种MLPA长探针的制备方法，所述制备方法包括，采用引物对以模板进行不对称PCR扩增，然后用限制性内切酶处理不对称PCR扩增产物，凝胶电泳经过酶切处理的不对称PCR扩增产物，切胶回收不对称PCR扩增产物中的单链DNA，即得到MLPA长探针；所述模板为与检测靶标序列无关的序列，所述不对称PCR扩增产物的序列内包括有多克隆位点，所述限制性内切酶与多克隆位点对应；所述引物对的一条引物从5’端到3’端依次包括与检测靶标序列相匹配的区段和与所述模板相匹配的区段；所述引物对的另一条引物从5’端到3’端依次包括与MLPA通用引物相匹配的区段和与所述模板相匹配的区段。