利用颠茄托品酮还原酶I型基因提高颠茄莨菪烷类生物碱含量的方法

摘要

本发明提供了一种利用颠茄托品酮还原酶（tropinonereductase，TR）I型（TR-I）基因提高颠茄莨菪烷类生物碱含量的方法。涉及包含目的基因TR-I基因的克隆；携带TR-I基因的植物高效表达载体的构建；携带TR-I基因的植物表达载体对颠茄的遗传转化；转基因颠茄的获得与检测。其过程是用高保真RT-PCR分离目的基因，构建携带目的基因的植物高效表达载体，采用转基因技术把目的基因导入颠茄高效表达，打破颠茄中莨菪烷类生物碱生物合成途径中的限速反应，推动代谢流往目标产物方向流动，提高颠茄中莨菪烷类生物碱的产量；在特定的筛选和诱导条件下获得转基因的颠茄；并对转基因颠茄进行分子检测和化学检测，最终获得莨菪烷类生物碱含量大大提高的转基因颠茄。本发明能提高颠茄莨菪烷类生物碱含量。

主权项

一种分离出的DNA分子，其特征在于，它包括：具有编码颠茄托品酮还原酶（tropinone reductase，TR）I型（TR‑I）基因核苷酸序列的编码区，采用引物f‑TR‑I：5’‑GAAGATCTATGGAAGAATCAAAAGATAACA‑3’和r‑TR‑I：5’‑GGGTGACCTAAAA TCCACCATTAGCAGTG‑3’从颠茄中扩增出来。