乳腺癌分子标志物相关探针的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及乳腺癌分子标志物相关探针的制备方法，还涉及利用这些探针制备乳腺癌荧光原位杂交检测试剂盒。利用本发明提供的方法制备的HER2、TOP2A、AGTR1基因探针，结合人17号染色体计数探针、杂交缓冲液、未标记的竞争性DNA及DAPI复染剂可以制备一种乳腺癌荧光原位杂交检测试剂盒，该试剂盒的应用大大提高了乳腺癌的检出率，更加准确的进行乳腺癌分型，指导个体化治疗方案制定，选择合适治疗药物，从而降低死亡率，减少复发风险，达到优化诊疗效果的目的。

主权项

一种HER2、TOP2A、AGTR1基因探针的制备方法，其特征在于3种基因探针的制备步骤包括：(1)克隆筛选：通过NCBI Mapview数据库检索所有含有HER2基因、TOP2A基因、AGTR1基因的克隆，并对这些克隆进行筛选，选择最优的克隆。(2)克隆培养和鉴定：按照筛选确定的克隆编号购买克隆Invitrogen RPCI11.C，取10μl克隆菌液添加到5ml含氯霉素抗性的TB培养液中，37℃摇床中摇菌活化培养8～12小时；再将菌液全部加入至500ml含氯霉素抗性的TB培养液中，37℃摇床中摇菌培养8～12小时；针对HER2、TOP2A、AGTR1基因探针使用相应的STS引物进行PCR扩增，并通过2％琼脂糖凝胶电泳对扩增产物片段进行分析，从而完成待选克隆的鉴定。(3)基因探针制备：对鉴定阳性的菌液，进行质粒DNA的提取；通过OD值的测定对质粒DNA进行定量；然后，通过缺口平移方法对质粒DNA进行荧光标记；对标记产物进行乙醇沉淀和浓缩；获得探针，避光、‑20±5℃储存。(4)基因探针验证：使用人类正常分裂中期淋巴细胞滴片进行探针验证。