利用树木内生菌代谢产物抑制白蚁肠道固氮菌的方法

摘要

利用树木内生菌代谢产物抑制白蚁肠道固氮菌的方法，涉及一种利用树木内生菌代谢产物抑制白蚁肠道固氮菌的方法。是要解决现有利用化学药剂杀灭白蚁的方法毒副作用大，造成严重的环境污染及人体危害的问题。方法：一、树木内生菌发酵液的制备；二、制备素琼脂平板；三、菌悬液的制备；四、半固体培养基的制备；五、取无氮半固体培养基，待冷却至50℃时加入菌悬液，混匀，倒入插有牛津杯的素琼脂平板上，待培养基凝固后拔出牛津杯，用移液枪向小孔中加入树木内生菌发酵液，在4℃冰箱中放置过夜，然后在30℃培养箱中培养16h，观察并用游标卡尺测定抑菌圈直径，即完成。本发明方法中树木内生菌代谢产物对白蚁肠道固氮菌有较好的抑制作用。

主权项

利用树木内生菌代谢产物抑制白蚁肠道固氮菌的方法，其特征在于利用树木内生菌代谢产物抑制白蚁肠道固氮菌的方法，按以下步骤进行：一、将树木内生菌挑取一环，接种到牛肉膏蛋白胨培养基中，在37℃、180r/min条件下培养2～3d，得到树木内生菌的培养液；将树木内生菌的培养液以5000r/min离心10～15min，取上清液，在无菌、35℃恒温水浴、150r/min的条件下浓缩至其体积的二十分之一，即得到树木内生菌发酵液；二、制备素琼脂平板：向1000mL水中加20g的琼脂，灭菌得素琼脂，然后向每个平板倒10～15mL的素琼脂，得素琼脂平板，将牛津杯立在素琼脂平板上；三、菌悬液的制备：挑取一环白蚁肠道固氮菌，接种到无氮斜面培养基上，于37℃培养12～24h，得白蚁肠道固氮菌斜面；取5mL无菌水，加到白蚁肠道固氮菌斜面上，用接种环在斜面上刮擦，再用无菌移液管吸打混匀，稀释至10 3，得菌悬液；四、半固体培养基的制备：向无氮液体培养基中加入琼脂，使琼脂的质量浓度为0.75％，加热至琼脂溶化，得到无氮半固体培养基；五、取20mL步骤四制备的无氮半固体培养基，待冷却至40～60℃时加入2mL步骤三制备的菌悬液，混匀，倒入步骤二得到的插有牛津杯的素琼脂平板上，待培养基凝固后拔出牛津杯，用移液枪向小孔中加入100μL步骤一得到的树木内生菌发酵液，在4℃冰箱中放置过夜，然后在30℃培养箱中培养16～24h，观察并用游标卡尺测定抑菌圈直径，即完成。