发明名称 |
一种微囊藻毒素的快速提取检测方法 |
摘要 |
本发明公开了一种微囊藻毒素的快速提取检测方法,其步骤:A、藻样预处理:天然水体中的水华微囊藻样品,经除杂物,用蒸馏水反复清洗后过滤;B、匀浆处理、干重测定:上述A步骤浓缩后的藻浆,按照体积比加入蒸馏水后,用匀浆器匀浆,另取藻浆测干重;C、甲醇一步法抽提毒素:上述B步骤样品干重测定的结果并计算,取藻干重、体积均为已知的藻浆:充分振荡混合后,冰箱中静置提取;D、离心纯化:将上述C步骤处理后的提取液离心,取上清,得到澄清的藻提取液;E、滤器过滤:合并D步骤上清液过滤;F、HPLC检测:采用优化的色谱条件快速分析毒素。本发明有可靠性高、所需仪器简单、操作方便、检测效率高等优点,适于常规实验室进行大批量的毒素提取和分析工作。 |
申请公布号 |
CN102393432A |
申请公布日期 |
2012.03.28 |
申请号 |
CN201110320853.X |
申请日期 |
2011.10.20 |
申请人 |
水利部中国科学院水工程生态研究所 |
发明人 |
沈强;胡菊香;胡俊 |
分类号 |
G01N30/88(2006.01)I;G01N30/14(2006.01)I |
主分类号 |
G01N30/88(2006.01)I |
代理机构 |
武汉宇晨专利事务所 42001 |
代理人 |
王敏锋 |
主权项 |
一种微囊藻毒素的快速提取检测方法,其步骤是:A、藻样预处理(1):天然水体中的水华微囊藻样品,用孔径30‑100 μm的浮游生物网采集,经除去树叶、浮萍有机杂物后,用蒸馏水反复清洗2—4次,再用孔径30‑100μm的浮游生物网浓缩成黏稠状的藻浆;B、匀浆处理、干重测定(2):上述A步骤浓缩后的藻浆,按照体积比加入2倍体积蒸馏水后,用匀浆器匀浆,使藻细胞团分散和藻浆密度均匀,取藻浆在80℃,24h,烘至恒重后于干燥器中冷却,分析天平上测干重;C、甲醇一步法抽提毒素(3):根据上述B步骤样品干重测定的结果并计算,取藻干重、体积均为已知的藻浆:其中藻干重为1‑20mg,通过补添蒸馏水和纯甲醇配制得到终体积1‑2ml甲醇浓度为体积比75%的提取液:样品藻干重和甲醇提取液重量体积比1/30000-1/5000,转入2ml Corning冻存管中密封;充分振荡混合后,‑20℃冰箱中静置提取1—4次,每次提取时间为2‑24h;D、离心纯化(4):将上述C步骤处理后的提取液离心10000 rpm×10min,取上清,得到澄清的藻提取液,离心得到的沉淀采用C步骤的方法继续提取1—3次,离心10000 rpm×10min取上清液;E、0.45μm微滤器过滤(5):合并D步骤处理得到的上清液,用0.45μm的非水系微滤器过滤处理,取滤液;F、HPLC检测(6):上述E步骤处理后的藻毒素提取液,用HPLC测定毒素浓度,色谱条件: YMC‑Pack ODS‑AQ色谱柱4.6 mm ×50 mm i.d., 5μm;流动相:乙腈0.1%TFA,水0.1%TFA;流速:2.5ml/min;柱温:40℃;检测波长:238 nm;梯度洗脱所用的时间程序为:0.1‑6 min 。 |
地址 |
430079 湖北省武汉市雄楚大街578号 |