利用玉米芯木糖渣水解液培养隐球酵母生产单细胞油的方法

摘要

本发明公开了一种利用玉米芯木糖渣水解液培养隐球酵母生产单细胞油的方法，较现有技术中利用玉米秸秆的无机酸或纤维素酶水解液进行单细胞油生产的方法，具有工艺简便、成本较低、无污染、油脂产量高的特点；显著克服了上述实验所需水解液的获得需要大量的稀酸等化学试剂带来的环境污染问题，同时极大地降低了生产成本。本发明对生物质资源的大量利用，处理了农业废料，对改善我国能源紧缺状况，保障我国能源可持续供给，缓解能源危机具有重要的实际意义和重要的经济价值。

主权项

一种利用玉米芯木糖渣水解液培养隐球酵母生产单细胞油的方法，步骤是：(1)糖化液制备：取玉米芯木糖渣，以15～35个滤纸酶活单位(FPA)每克干木质纤维素的量添加纤维素酶液，在35～55℃下糖化60～80h；收集糖化液于75～85℃下水浴30～60min使残余纤维素酶失活，然后将糖化液于7000～10000rpm下离心6～10min，得澄清的糖化液；(2)糖化液的脱毒处理：将上述糖化液水浴加热至80℃，再加入其质量百分比为0.6～1.2％的活性炭，搅拌30～50min，然后真空抽滤去除活性炭，得脱毒的糖化液；(3)利用糖化液发酵隐球酵母：以脱毒的糖化液、4g/l酵母粉的配方制备产油糖化液发酵培养基，将活化好的隐球酵母(Cryptococcus curvatus)以体积百分比为4～10％的接种量接种于产油糖化液发酵培养基中，于30±2℃、200±50rpm，摇床震荡培养60～80h，得含单细胞油的发酵液；(4)单细胞油粗提：将步骤(3)的发酵液于7000～9000rpm下离心8～15min收集菌体，蒸馏水清洗菌体3～4次；以酸热‑有机试剂法提取单细胞油，即：以3g湿菌体∶10ml的比例加入4M HCl，涡旋混合后，沸水浴60min，再冰水浴30min；然后按3g湿菌体∶5ml的比例加入无水乙醇，按3g湿菌体∶15ml的比例加入乙醚，震荡后再按3g湿菌体∶15ml的比例加入石油醚，振荡放气，收集有机试剂层，烘干挥发去除有机试剂后得单细胞油。