利用地衣芽孢杆菌降解羽毛制备菌肽复合蛋白饲料添加剂的方法

摘要

本发明利用益生菌地衣芽孢杆菌CCTCCM208251具有降解羽毛活性并能以羽毛为唯一的碳源氮源进行生长的特点，提供了一种降解羽毛制备菌肽复合蛋白饲料的方法。工艺步骤为羽毛处理、种子液制备、底物配制、底物发酵、过滤、喷雾干燥等过程。本发明工艺简单，利废环保，节约资源，菌肽复合含量高，符合饲料安全。羽毛降解率可达80％。本发明不仅有效的处理了废料羽毛并且获得大量的可溶性蛋白小肽和益生菌，所得菌肽复合蛋白用于饲料添加，有很好的经济效益和社会效益。

主权项

一种利用地衣芽孢杆菌降解羽毛制备菌肽复合蛋白饲料添加剂的方法，其特征在于步骤为：⑴、收集羽毛，去除杂质，浸泡水洗压干2‑3次，将羽毛风干；将上述羽毛放入0.02~0.05%的NaOH的水溶液中，煮沸15min；滤去NaOH溶液，用自来水浸泡水洗压干2‑3次，并将羽毛烘干保存备用；⑵、将茄形瓶中保藏的CCTCCM208251菌种在固体LB平板上划线，使其活化；从上述LB平板中挑选单菌落接种于12~15瓶250mL锥形瓶中，瓶内含100mL液体LB培养基，放入摇床，在37℃、220rpm的条件下培养10h；分别从各瓶发酵液中取样并送镜检，选取无污染，生长旺盛的发酵液作为种子液；⑶、按5~10 %的比例将上述一级种子发酵液接种至40L发酵罐中，罐内含25L 液体LB培养基，进行二级种子扩大培养，发酵7‑8h，取样送镜检，将无污染的发酵液保留在发酵罐中备用；⑷、在400L的发酵罐中配制250L的发酵底物，并用108‑110℃灭菌，发酵底物成分为：（w/v％）0.3%硝酸钾，0.1%磷酸氢二钾，0.06%磷酸二氢钾，0.04% (w/v)六水氯化镁，0.5% NaCl，2%羽毛，0.1％ 山梨醇，其余为水，另加（v/v%）0.5%豆油，0.5%聚醚用于消泡；将上述种子液接种至400L发酵罐内，按5~10 %的接种量接种，进行分批发酵，发酵条件为：37℃，pH值自然，罐压为0.05 Mpa，通入空气，通气量与发酵罐体积比为1:1.3‑1.5，转速330‑‑380rpm；⑸、在发酵过程中，每隔0.5h记录一次数据，记录生产时间，罐温，罐压，pH值，泡沫情况，循环水温，罐内空气温度；每隔8h取发酵液50mL于塑料离心管内并依次编号，4℃保存备用，待发酵结束后将所有样品送检，检测其菌体含量及可溶性蛋白或小肽的含量；⑹、发酵70‑‑120h放罐，放罐指标为：结合摇瓶数据，没有明显的羽毛固形物存在，取样送检，将样品作镜检并测量其稀释150倍后在600nm波长下的OD值，所接菌种全部形成芽孢，当取样检测OD值为0.200~0.400时，发酵结束；⑺、将上述发酵液用单层纱网过滤两次，去除固形物；按10%的比例加入可溶性淀粉，搅拌均匀；用高温离心式喷雾干燥塔将发酵液喷成粉末，进口温度为190℃，出口温度为80℃；⑻、将粉末收集装袋，检验出厂。