一种诱导玉米小孢子形成胚状体的方法

摘要

本发明涉及一种诱导玉米小孢子形成胚状体的方法，属于植物育种领域。主要步骤是选取合适的雄穗进行消毒，然后在提取液中挤压小穗、过筛、离心收集小孢子，再接种到诱导培养基中，置于32～36℃的烘箱热激处理24～48h，再置于25～28℃的培养室，在摇床上进行暗培养20～25天，形成胚状体。本发明诱导玉米小孢子形成胚状体的方法，具有成胚率高、培养周期短、操作简单等优点。本发明用于玉米遗传育种，将大大加快育种进程，显著地提高选择效果。

主权项

一种诱导玉米小孢子形成胚状体的方法，其特征在于依次包括以下步骤：1)玉米长到大喇叭口时期，选取生长健壮，处于单核晚期的雄穗，用保鲜膜包裹，于5～8℃冷处理7～14天；2)将雄穗上的小穗剥下进行表面消毒后，转移到离心管中，加入预冷至3～5℃的提取液，挤压小穗获得小孢子悬浮液，经100目不锈钢筛过滤，滤液离心处理后，倒掉上清液，然后加诱导培养基，所获得的小孢子经镜检计数后，以10,000～20,000个/毫升的密度接种到培养器皿内，用封口膜封口；所述的提取液成分如下：150mg/l(NH4)2SO4+3000mg/l KNO3+150mg/l CaCl2·2H2O+450mg/l MgSO4·7H2O+600mg/l KH2PO4+60g/l蔗糖+2.5g/l 3‑(N‑吗啡啉)丙磺酸，加KOH调节PH为6.0；离心处理过程具体为在100g下离心3min，重复3次；所述的诱导培养基为“正14”培养基+120g/l蔗糖+0.1mg/l 2，3，5三碘苯甲酸+500mg/l酪蛋白水解物+200mg/l活性碳+16mg/l琼脂糖，加KOH调节PH为6.0；3)将培养器皿放到32～36℃的烘箱热激处理24～48h，再置于25～28℃的培养室，在摇床上进行暗培养20～25天，形成胚状体。