从表达腺病毒E1A蛋白的细胞中获得唾液酸化增加的重组蛋白质的方法及由此获得的蛋白质

摘要

本发明提供了包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，特征在于所述聚糖包含LewisX结构及每个EPO分子平均至少6个唾液酸部分。本发明进一步提供了获得包含一或多种同种型红细胞生成素(EPO)的组合物的方法，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含平均每个EPO分子至少6个唾液酸及0—2个Lewis x结构，所述方法包括：a)提供含有可表达形式的编码腺病毒ElA蛋白的核酸序列及进一步含有可表达形式的编码EPO的核酸的真核细胞，其中所述细胞进一步含有在异源启动子控制下的编码唾液酸转移酶、优选α-2，6-唾液酸转移酶或α-2，3-唾液酸转移酶的核酸序列；b)在无血清培养基中培养所述细胞，使得EPO在所述细胞中表达；c)从所述细胞和/或培养基中收获表达的EPO；及d)纯化并分级分离EPO以获得每个EPO分子N联聚糖的平均唾液酸含量增加的级分，获得包含一或多种同种型EPO的组合物，所述EPO包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖包含每个EPO分子平均至少6个唾液酸及0—2个Lewis x结构。

主权项

一种获得包含一或多种同种型红细胞生成素的组合物的方法，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖平均包含每个红细胞生成素分子至少10个唾液酸及0‑1个Lewis x结构，所述方法包括：a)提供含有可表达形式的编码腺病毒E1A蛋白的核酸序列及进一步含有可表达形式的编码红细胞生成素的核酸的真核细胞，其中所述细胞进一步含有在异源启动子控制下的编码唾液酸转移酶的核酸序列，其中所述真核细胞是在ECACC中以96022940号保藏的PER.C6细胞；b)在无血清培养基中悬浮培养所述细胞，使得红细胞生成素在所述细胞中表达；c)从所述细胞和/或从培养基中收获表达的红细胞生成素；和d)纯化及分级分离红细胞生成素，以获得每个红细胞生成素分子的N联聚糖的平均唾液酸含量增加的级分，获得包含一或多种同种型的红细胞生成素的组合物，所述红细胞生成素包含与其连接的聚糖，其中所述聚糖平均包含每个红细胞生成素分子至少10个唾液酸及0‑1个Lewis x结构。