一种汉坦病毒群的简并RT-PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种汉坦病毒群的简并RT-PCR检测方法，通过RNA提取、RNA逆转录、PCR反应和琼脂糖凝胶电泳，PCR反应中上游引物溶液含有序列为：GCAACAGCAACATGGTTTcartaytayac的引物G1，下游引物溶液含有序列为：CTTCTTCATTCATATTTCCATGCarnccyttytc的引物G2，引物中5＇端非兼并共有序列在不增加引物简并度的情况下能稳定3＇兼并核心区与模板结合作用，提高了兼并PCR反应的特异性，可以扩增检测汉坦病毒属内各类病毒，如汉滩型病毒、汉城型病毒、普马拉型病毒、多不拉伐型病毒、安第斯病毒型和索托帕拉雅型病等，防止国外流行株传入国内，也能对与扩展基因同源的未知病毒进行检测。

主权项

一种汉坦病毒群的简并RT PCR检测方法，其特征在于包括下述步骤：a、RNA提取：用RNA提取试剂盒提取病毒的RNA，得到RNA，具体提取方法依说明书进行；b、RNA逆转录：用RNA逆转录试剂盒对上述RNA进行RNA逆转录，得到PCR模板，具体逆转录方法依说明书进行； c、PCR反应： PCR反应体系为10×PCR缓冲液2.5μL、浓度为25mM/ L的MgCl2溶液1.5μL、浓度为10mM/ L的dNTP液0.5μL、浓度为5U/μL的Taq酶液0.5μL、上游引物溶液1μL、下游引物溶液1μL，上述PCR模板2μL，灭菌去离子水16μL；反应条件为94℃预变性5min，94℃变性30s，52℃退火30s，72℃ 延伸1min，35个循环，72℃延伸7min，得到的PCR产物4℃保存，所述上游引物溶液含有浓度为25mM/L的引物G1，所述引物G1的核苷酸序列为GCAACACCAA CATGGTTTca rtaytayac，所述下游引物溶液含有浓度为25mM/L的引物G2，所述引物G2的核苷酸序列为CTTCTTCATT CATATTTCCA TGCarnccyt tytc； d、琼脂糖凝胶电泳：将上述PCR产物用1 1.5%浓度琼脂糖凝胶电泳检测目标条带，电泳条件电压100v，30min，将电泳结果用凝胶成像系统分析，若结果出现478bp大小片段的条带，则为汉坦病毒群。