水体环境中铜绿微囊藻噬藻体的SYBR-Green荧光定量RT-PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种水体环境中铜绿微囊藻噬藻体的SYBR-Green荧光定量RT-PCR检测方法，属于分子生物学领域。本发明基于铜绿微囊藻噬藻体Ma-LMM01的尾鞘蛋白基因g91片段，利用Premier5.0和Oligo6软件设计了定量PCR外参标准品引物SH-WF和SH-WR和定量PCR引物SH-RTF和SH-RTR，对水体环境中铜绿微囊藻噬藻体数量进行检测，旨在分析水体中铜绿微囊藻噬藻体的数量随时间、空间变化规律。

主权项

水体环境中铜绿微囊藻噬藻体的SYBR‑Green荧光定量RT‑PCR检测方法，包括下列步骤：    (1) 基于铜绿微囊藻噬藻体Ma‑LMM01的g91基因片段，利用引物设计软件设计定量外参标准品引物SH‑WF/ SH‑WR和定量PCR引物SH‑RTF/SH‑RTR：SH‑WF：5’‑CTACCAGTGGCCGATATTTCCTT‑3’SH‑WR：5’‑GGTAAAGCCTCTATTAGCAGTGTTG‑3’SH‑RTF：5’‑ACATCAGCGTTCGTTTCGG‑3’SH‑RTR：5’‑GTGACAATCTGGTTAGGTAGGTCG‑3’；(2) 提取待检水样浓缩液中噬藻体DNA基因片段；(3) 用定量外参标准品引物SH‑WF:5’‑CTACCAGTGGCCGATATTTCCTT‑3’和SH‑WR5’‑GGTAAAGCCTCTATTAGCAGTGTTG‑3’扩增并构建铜绿微囊藻噬藻体g91基因定量检测的外参标准品，根据标准品Ct值，得到g91基因定量标准曲线；(4) 用定量PCR引物SH‑RTF：5’‑ACATCAGCGTTCGTTTCGG‑3’和SH‑RTR：5’‑GTGACAATCTGGTTAGGTAGGTCG‑3’扩增待测样品中铜绿微囊藻噬藻体g91基因序列，将所测样品的Ct值与g91基因定量标准曲线对比得到检测水样中噬藻体g91基因拷贝数量。