一种内含肽介导的类弹性蛋白纯化重组蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种利用内含肽介导的类弹性蛋白(ELPs)纯化重组药物蛋白的方法。本方法基于类弹性蛋白(ELPs)的温度依赖的相变特性和内含肽的标签自切割功能，利用二者的结合开发出一种无需亲和介质和标签切除酶的方法，此方法操作简单，成本低廉，具有极好的应用前景。

主权项

一种内含肽介导的类弹性蛋白纯化重组蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将待分离蛋白的基因、内含肽和类弹性蛋白ELPs连接到原核表达载体PET‑32a(+)上，构成融合表达载体PET‑ELPs‑intein‑待分离蛋白基因；(2)步骤(1)中构建好的表达载体热冲击转化进大肠杆菌DH5α菌株，然后将鉴定过的阳性转化子亚克隆进大肠杆菌BL21表达菌株中，用IPTG和低温进行诱导表达；(3)收集步骤(2)获得的菌体，超声破碎，离心去除细胞碎片，收集得到上清细胞裂解液，置于4℃冰箱备用；(4)测定蛋白的相变温度Tt；(5)用ITC循环方法纯化重组蛋白和切除ELPs标签。