一种高产γ-氨基丁酸重组大肠杆菌/pET-28a-lpgad的构建方法及其应用

摘要

一种高产γ-氨基丁酸重组大肠杆菌/pET-28a-lpgad的构建方法及其应用，属于发酵工程中生物技术领域。具体涉及一种构建遗传工程菌的方法、重组酶酶学性质研究及其在转化L-谷氨酸产GABA上的应用。首先，PCR扩增获得植物乳杆菌GB 01-21谷氨酸脱羧酶(GAD)基因，构建了重组质粒pET-28a-lpgad，并在E.coli BL21(DE3)成功表达，其次，粗酶液采用Ni柱亲和层析纯化获得重组GAD，并对其酶学性质进行初步研究，用于指导转化条件的优化。最终5L发酵罐上进行转化实验，GABA累积浓度可达204.5g/L，摩尔转化率为97.92％，为进一步工业化应用打下了良好的基础。

主权项

本专利构建一株高效转化L‑谷氨酸为γ‑氨基丁酸诱导型重组大肠杆菌，并对高表达谷氨酸脱羧酶酶学性质进行研究并应用于重组菌转化γ‑氨基丁酸条件的优化，其特征是首次扩增了经多次诱变筛选获得的具有较高谷氨酸脱羧酶活性的植物乳杆菌GB 01‑21(保藏号CCTCC M 209102)的谷氨酸脱羧酶编码基因lpgad，构建高产γ‑氨基丁酸重组大肠杆菌/pET‑28a‑lpgad。最终重组菌转化液中产物GABA浓度为204.5g/L，转化率为97.92％。