一种药用金线莲组织培养一步成苗快速繁殖方法

摘要

本发明公开了一种药用金线莲组织培养一步成苗快速繁殖方法，主要包括：1)培养基准备，该步骤包括配制，分装，灭菌三步；2)外植体处理和接种，该步骤分为两种情形，当采用自然生长的植株作为外植体时包括清洗，消毒，接种三步；当采用组培无菌苗时直接进行无菌接种；3)培养；4)移栽。本发明以自然生长或组培继代培养产生的金线莲植株中间茎段为外植体，在无菌条件下将含有一个茎节的茎段接种于培养基上，结果表明：最适宜的培养基经过四个月的培养后，每个外植体平均成苗数4.8株，每株平均叶净增3.6张、平均发根数2.5条、平均鲜重净增525.6mg。组培苗移栽至基质中生长良好，3个月后植株成活率达95％以上。本发明可大大缩短金线莲组培成苗时间，显著提高培养效率，降低育苗成本，可作为金线莲种苗生产的重要方法。

主权项

一种药用金线莲组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：1)培养基准备该步骤包括配制，分装，灭菌三步，其中配制：以1/2MS为基本培养基，每升添加6‑苄氨基嘌呤2mg、α‑萘乙酸1.0～1.5mg、芸苔素内酯0.05mg、香蕉100g、琼脂6.5g和蔗糖25g，混合后的培养基的pH值调节至5.6；分装：将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；灭菌：将加入培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅内灭菌，灭菌条件为：121℃、105kPa下灭菌15分钟，灭菌后及时取出培养瓶，冷却备用；2)外植体处理和接种该步骤分为两种情形，当采用自然生长的植株作为外植体时包括清洗，消毒，接种三步，其中清洗：选择自然生长、无病虫害的健壮植株，用加入少许肥皂粉的水清洗植株，后用流水冲洗2小时；消毒：在无菌条件下，去除叶片，将植株茎段在75％的酒精中浸润10秒后，放入10％的次氯酸钠消毒15分钟，用无菌水清洗6遍，沥干水分，放入无菌的培养皿中备用；接种：将消毒后备用的茎在无菌条件下切成长约1cm、含一个茎节的若干茎段，接种子准备好的培养基上，每瓶接1个茎段；当采用组培无菌苗时直接进行无菌接种，即在无菌条件下将组培无菌苗去叶，将茎切成长约1cm、含一个茎节的若干茎段，接种于准备好的培养基上，每瓶接1个茎段；3)培养该步骤将接好种的培养瓶移入培养室进行幼苗的诱导与培养，培养条件为：温度25±2℃，光照时间每天12小时，光照强度1500～20001x，培养时间四个月左右，培养期间要勤检查，发现污染的要及时去除；4)移栽选苗高6～8cm、具叶3张以上、茎基直径约2mm、发根2～3条的试管苗，炼苗4天后，洗净附着在植株上的培养基，并晾干洗涤水后移栽至1份菜园土+2份粗砂+1份木屑，或1份菜园土+1份粗砂+2份木屑的基质中。