一种利用单克隆抗体技术制备碱性磷酸酶的方法

摘要

本发明涉及一种利用单克隆抗体技术制备碱性磷酸酶的方法，通过以下步骤制备：（一）制备腹水；（二）制备碱性磷酸酶免疫亲和层析柱；（三）纯化抗碱性磷酸酶单克隆抗体；（四）制备抗碱性磷酸酶单克隆抗体的免疫亲和层析柱；（五）提纯碱性磷酸酶。此方法能够快速提取大量碱性磷酸酶，所提取的碱性磷酸酶纯度高、活性高。

主权项

一种利用单克隆抗体技术制备碱性磷酸酶的方法，其特征在于通过以下步骤制备：（一）制备腹水：用碱性磷酸酶免疫Balb/c小鼠，再用免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经筛选克隆获得分泌抗碱性磷酸酶单克隆抗体的杂交瘤细胞，体内接种杂交瘤细胞，制备腹水；（二）制备碱性磷酸酶免疫亲和层析柱；（三）纯化抗碱性磷酸酶单克隆抗体：将步骤（一）得到的腹水加入碱性磷酸酶免疫亲和层析柱，PBS洗净柱子，甘氨酸洗脱液洗脱结合蛋白，加Tris缓冲液调整pH值，透析，收集纯化的抗碱性磷酸酶单克隆抗体；（四）制备抗碱性磷酸酶单克隆抗体的免疫亲和层析柱；（五）提纯碱性磷酸酶： 将用于提取碱性磷酸酶的动物组织粉碎，匀浆，离心取上清液，依次经澄清过滤器、混合纤维素滤膜过滤，所得滤液经抗碱性磷酸酶单克隆抗体免疫亲和层析柱，依次用PBS、生理盐水、硫氰酸钾洗脱液洗脱柱子并分步收集。