拟除虫菊酯类农药多克隆抗体的制备方法

摘要

本发明提供一种拟除虫菊酯类农药多克隆抗体的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：（a）合成人工抗原；（b）合成包被原；（c）制备抗体。本发明的抗体不仅能识别半抗原，而且识别含半抗原结构在内的大分子化合物，抗体对氯菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯等多种菊酯化合物都有一定的交叉识别。本发明根据几种拟除虫菊酯类农药的共性结构特点设计制备了广谱性抗体，并且可以建立针对多种常见菊酯类药剂快速筛选检测方法。

主权项

拟除虫菊酯类农药多克隆抗体的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：（a）合成人工抗原：PBA 溶于DMF中，加入等摩尔数的DCC和NHS，室温搅拌过夜，再将混合液慢慢滴加至含BSA 的缓冲液，室温磁力搅拌30min，然后在4℃温度下反应6 h，最后反应液在4℃温度下且pH为7.2的磷酸盐缓冲液中透析过夜；（b）合成包被原；（c）制备抗体：取雄性新西兰大白兔，在免子疫前1周采血制备阴性血清；免疫程序为：免疫剂量为每kg兔子体重1 mg免疫原，加入FCA将免疫原制成油包水乳浊液，在兔子背部皮下进行多点注射；隔2周进行第2次免疫，免疫方法是先加入FICA将免疫原制成油包水乳浊液，再在兔子背部皮下进行多点注射；此后，每隔3周免疫1次，方法同第2次免疫；从第4次免疫开始，每次免疫1周后在兔子耳缘静脉采少量血，分离血清，采用间接非竞争ELISA法测定抗体效价；当效价达2×104后，进行最后一次免疫，用加倍量抗原的生理盐水稀释液在兔子耳缘静脉注射，1周后心脏采血致兔子死，分离血清；采用硫酸铵二步沉淀法纯化抗体，制成冻干粉于‑20℃保存备用。