产气荚膜梭状芽孢杆菌快速检测试剂盒的制备和使用方法

摘要

本发明涉及一种产气荚膜梭状芽孢杆菌快速检测试剂盒的制备和使用方法。其中试剂盒内包括环介导等温扩增反应液A、Bst DNA聚合酶B、显色剂C；反应液A含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、上游内引物5-TTGCCATTCATATCTAGCTAATGCTCTATACCTGACACAGGGGA-3、下游内引物5-CAAGCTACATTCTATCTTGGAGAGGATTAGCAGGATGATATGGAGTA-3、上游外引物5-TTTCTCAAAGGATAATAGTTGGT-3、下游外引物5-ATGTCCTGCGCTATCAAC-3和甜菜碱；检测创伤弧菌的方法包括待测样品或者细菌DNA的提取、创伤弧菌的环介导等温扩增反应和显色检测。本发明的优点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。

主权项

一种产气荚膜梭状芽孢杆菌快速检测试剂盒，其特征是其中的试剂包括下列(1)‑(4)：(1)环介导等温扩增反应液A：包括10×Thermopol反应缓冲液、300‑500μmol/L dNTP、2‑4mmol/L硫酸镁、0.8‑1.2μmol/L上游内引物、0.8‑1.2μmol/L下游内引物、0.2‑0.3μmol/L上游外引物、0.2‑0.3μmol/L下游外引物和1‑1.5mol/L甜菜碱；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷‑盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X‑100；其中所述的上游内引物5‑TTGCCATTCATATCTAGCTAATGCTCTATACCTGACACAGGGGA‑3、下游内引物5‑CAAGCTACATTCTATCTTGGAGAGGATTAGCAGGATGATATGGAGTA‑3、上游外引物5‑TTTCTCAAAGGATAATAGTTGGT‑3、下游外引物5‑ATGTCCTGCGCTATCAAC‑3；(2)UNG酶：1U/μL；(3)Bst DNA聚合酶B：8U/μL；(4)显色剂C：为10％的荧光染料SYBR GREEN I或者DNAGreen。