两株裂解性哈维弧菌噬菌体制剂的制备及其应用

摘要

本发明涉及制备两株裂解性噬菌体制剂及其应用，用于减少刺参体内、刺参养殖环境以及刺参加工品中靶病原菌数量，噬菌体的宿主菌为哈维弧菌，分离得到的两株噬菌体vp-1和vp-2对哈维弧菌有较强的裂解性，对刺参及产品起到保护作用，一种新型绿色生物消毒制剂。将噬菌体纯化，扩增培养以及进一步大规模富集。由于采用裂解性噬菌体特异性的杀灭具有抗药性的哈维弧菌，防治由于抗生素滥用而导致的抗药性以及抗生素在动物体内残留等问题。本发明可以配置成喷洒液或者淋洗液对患病刺参、养殖水体环境起到净化和保护作用，本发明没有任何毒副作用，减少食源性污染，为食品安全起到保障作用。

主权项

两株裂解性哈维弧菌噬菌体制剂的制备，从废水中分离得到对哈维弧菌有裂解作用的两株噬菌体vp‑1和vp‑2，其特征在于如下步骤：(1)宿主菌的准备：从刺参分离出致病性哈维弧菌；(2)水样及其处理：将废水加入CaCl2、MgCl2对水样做预处理；(3)噬菌体分离：将上述经过预处理的水样，离心，收集上清；将上清过滤除去菌体和杂质，得噬菌体原液；(4)采用双层平板法进行噬菌体的鉴定：在平板上形成空斑，则说明在滤液内有针对该宿主菌有裂解性的噬菌体存在；(5)噬菌斑的纯化：当噬菌斑的形态、大小、完全一致时，即得到纯化了的噬菌体，将该噬菌体保存，即为哈维弧菌噬菌体vp‑1和vp‑2；(6)噬菌体的液体增殖：离心过膜，获得高效价的噬菌体上清液；(7)通过聚乙二醇8000沉淀噬菌体颗粒，溶解于SM缓冲液中，亲和层析柱去除残留的内毒素，即获得噬菌体vp‑1和vp‑2的混合制剂。