奶牛乳房炎主要致病菌的检测基因芯片及检测方法

摘要

本发明提供了奶牛乳房炎主要致病菌的检测基因芯片及检测方法。所述基因芯片包括固相载体和固定在固相载体上的特异性检测探针，所述特异性检测探针包含以大肠杆菌16S rDNA保守区为基底序列设计的通用引物序列之间的6种奶牛乳房炎主要致病菌的可变区域内设计的特异性寡核苷酸杂交探针；所述6种奶牛乳房炎主要致病菌为无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、奇异变形杆菌和金黄色葡萄球菌。本发明精确限定了PCR反应的退火温度、优化了PCR扩增的核酸片段和基因芯片进行杂交的条件，获得很好的杂交效果，最终得到准确的检测结果。本发明特异性好，准确率高，稳定性可靠，检测结果假阳性率低，同时操作步骤简单，易于推广使用。

主权项

一种奶牛乳房炎主要致病菌的检测基因芯片，包括固相载体和固定在固相载体上的特异性检测探针，其特征在于所述特异性检测探针包含以大肠杆菌16S rDNA保守区为基底序列设计的通用引物序列之间的6种奶牛乳房炎主要致病菌的可变区域内设计的特异性寡核苷酸杂交探针；所述6种奶牛乳房炎主要致病菌为无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、奇异变形杆菌和金黄色葡萄球菌；所述通用引物序列为：上游引物：5‘‑GCTGGCGGCAGGCCTAACACATGCAAG‑3；下游引物：5‘‑Cy3‑CGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGG‑3；所述特异性寡核苷酸杂交探针为：无乳链球菌：5‑AGACTGATGAGTTGCGAACGGGTG‑3；停乳链球菌：5‑GGTAACCTACCTCATAGCGGGGGATAAC‑3；大肠杆菌：5‑CGGTAACAGGAAGCAGCTTGCTTCT‑3；肺炎克雷伯氏菌：5‑GAGCGGTAGCACAGAGAGCTTGCTCTCGGGTGAC‑3；奇异变形杆菌：5‑CGGTAACAGGAGAAAGCTTGCTTTCTTGCTGA‑3；金黄色葡萄球菌：5‑ATATGTGTAAGTAACTGTGCACATCTTGACGGTAC‑3。