基于磁分离与引物延伸的化学发光检测拷贝数多态性的方法

摘要

基于磁分离与引物延伸的化学发光检测拷贝数多态性的方法，制备适合于获取核酸序列拷贝数信息的磁性介质；设计能与目标核酸序列特异性结合的引物与探针；根据引物设计数据确定Tm值，使引物与变性成单链的DNA模板充分结合；加入延伸反应缓冲溶液，捕获目标核酸片段至磁性介质；磁分离；对反映至磁性介质上的模板中的目标基因与内参基因核酸片段进行化学发光检测，比较目标基因/内参基因核酸片段化学发光比值在待测模板与对照模板中的差异从而得到目标基因在待测模板中相对于对照模板中的拷贝数变化信息。

主权项

基于磁分离与引物延伸的化学发光检测拷贝数多态性的方法，其特征在于：1) 制备适合于获取核酸序列拷贝数信息的磁性介质；2) 设计能与目标核酸序列特异性结合的引物与探针，探针5’端的修饰对应1)所述磁性介质上所修饰之功能化基团，之后以产物捕获方式获取目标核酸片段的拷贝数信息，产物捕获方式指先进行引物延伸反应，再利用磁性介质表面连接的特异性探针与延伸反应产物之间的碱基互补配对捕获延伸得到的核酸片段；3) 根据引物设计数据确定Tm值，根据Tm值确定退火温度，加入杂交缓冲溶液，经过变性与退火过程，使引物与变性成单链的DNA模板充分结合；4) 加入延伸反应缓冲溶液，进行一个循环后结束反应，再加入已制备的连接有特异性探针的磁性介质与延伸产物进行杂交反应，从而捕获目标核酸片段至磁性介质；5) 磁分离，对磁性介质进行清洗，即得到获取了待测模板中目标核酸片段拷贝数信息的磁性介质；6) 对反映至磁性介质上的模板中的目标基因与内参基因核酸片段进行化学发光检测，比较目标基因/内参基因核酸片段化学发光比值在待测模板与对照模板中的差异从而得到目标基因在待测模板中相对于对照模板中的拷贝数变化信息。