通过敲除口蹄疫病毒受体整合素αv亚基基因获得抗口蹄疫转基因牛的方法

摘要

本发明公开了一种通过敲除口蹄疫病毒受体整合素αv亚基基因获得抗口蹄疫转基因牛的方法，是将线性化的携带有报告基因的突变的整合素αv亚基基因的打靶载体转染牛体细胞，通过同源重组获得替换整合素αv亚基基因的核供体细胞，将核供体细胞核导入牛的去核卵母细胞中得到重构胚，再将重构胚移入代孕牛子宫中，得到的子代即为整合素αv亚基基因被敲除的杂合子转基因牛。杂合子转基因牛经二次打靶和体细胞克隆获得纯合子转基因牛。用本方法获得的转基因牛低表达或不表达口蹄疫病毒受体整合素αv亚基基因，使FMDV感染率明显下降，其具备了抗FMD的能力。该发明打破了传统的通过免疫学手段预防FMD的思维模式，为控制和消灭牛FMD开辟了新的途径。

主权项

一种通过敲除口蹄疫病毒受体整合素αv亚基基因获得抗口蹄疫转基因牛的方法，其特征在于：是将碱基序列如序列表中序列1所示的线性化的携带有报告基因的突变的整合素αv亚基基因的打靶载体转染正常牛的牛胎儿成纤维细胞，通过同源重组获得替换整合素αv亚基基因的核供体细胞，将核供体细胞核导入牛的去核卵母细胞中得到重构胚，再将重构胚移入代孕牛子宫中，得到的子代即为整合素αv亚基基因被敲除的杂合子转基因牛。