以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法

摘要

本发明公开了一种以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法，是选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC03120菌株，在30～35℃利用固体发酵培养48～72小时，然后自然风干35～45小时，再经粉碎过80目筛，制得含枯草芽孢杆菌活菌的固体发酵成品。本发明方法原料成本低廉，生产工艺简单，不需要大型设备，且产物中枯草芽孢杆菌有效活菌高，为600亿/克发酵干料的产品，能够满足微生物肥料的大量需求。

主权项

一种以固体发酵生产枯草芽孢杆菌活菌的方法，步骤是：(1)菌种选择：选用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ACCC03120菌株；(2)种子培养：将步骤(1)所述菌株，在无菌条件下用接种环接1～2环于90～100mL液体种子培养基中，以150～180转/分钟的转速、35～40℃震荡培养24～36小时，得一级种子液；以体积比1～3％的接种量，将一级种子液再次接种于同样配方的液体种子培养基中，以150～180转/分钟的转速、35～40℃震荡培养18～36小时，得二级种子液；(3)固体发酵培养：以5～10％质量比的接种量，将二级种子液接种于经121℃、30分钟灭菌的固体培养基中，随后将接种的固体培养基以4～7厘米的厚度平摊于底部带空隙的料筐中，再将料筐置于灭菌的固体发酵房内的搁架上发酵，控制环境温度在30～35℃，并时常翻料使料筐中层料温不高于47℃，同时利用空压机往固体发酵房中通无菌风，发酵48～72小时，发酵结束；(4)发酵产物晾干：将步骤(3)发酵产物平摊于干净的水泥地面上自然风干35～45小时，其间取样镜检和测定水分，当芽孢率超过70％，含水率低于10％时，风干过程结束，收集产物并粉碎，过80目筛，所得粉末即为含枯草芽孢杆菌活菌的固体发酵成品；上述液体种子培养基配方及制备方法为：以重量份计，将玉米粉0.5‑2份、豆浆1‑4份、葡萄糖0.1‑1份、硫酸铵0.1‑1份、硫酸锰0.005‑0.02份、硫酸镁0.001‑0.03份、磷酸氢二钾0.001‑0.03份混合，加纯净水1‑91份溶解，调节pH值至6‑8，蒸汽灭菌后备用；上述固体发酵培养基配方及制备方法为：以重量份计，将麸皮20‑40份、玉米粉2‑8份、豆粕2‑8份、红糖0.1‑5份、糖蜜0.1‑5份、稻壳1‑10份、硫酸铵0.1‑1份、硫酸镁0.01‑1份、硫酸锰0.01‑1份、酵母粉0.001‑0.1份、自来水20‑75份均匀混合，然后蒸汽灭菌备用，自然pH，不需额外调节。